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酶免疫渗滤检测用装置及其制作方法

基本信息

  • 申请号 CN00110994.4 
  • 公开号 CN1144046C 
  • 申请日 2000/04/07 
  • 公开日 2004/03/31 
  • 申请人 郭占军  
  • 优先权日期  
  • 发明人 郭占军 赵华 郭爱芹 杨焕云  
  • 主分类号  
  • 申请人地址 252000山东省聊城市文化路1号 
  • 分类号  
  • 专利代理机构 济南信达专利事务所有限公司 
  • 当前专利状态 发明专利权部分无效宣告的公告 
  • 代理人 郝英涛 
  • 有效性 有效专利 
  • 法律状态
  •  

权利要求书

1、酶免疫渗滤检测用装置,由盒体(1)组成,盒体(1)内自 上而下设有过滤扩展层(2)、渗滤层(4)和废液吸收层(5),其特 征在于:在上述过滤扩展层(2)与渗滤层(4)之间还设有一个海藻 糖稳定化的酶标记物层(3);上述渗滤层(4)为含有海藻糖稳定化 的固相特异性抗原或抗体的硝酸纤维素膜。
2、一种制造酶免疫渗滤检测用装置的方法,包括以下步骤:提 供一盒体,该盒体内自上而下设有过滤扩展层(2)、酶标记物层(3)、 渗滤层(4)和废液吸收层(5),其特征在于:取固相酶标记物和海 藻糖加蒸馏水溶解为点样液,再取点样液点样于滤纸上得到固相酶标 记物层(3);将固相特异性抗原或抗体加入海藻糖后再加适量蒸馏水 后形成点样液,将该点样液点样于硝酸纤维素膜上形成渗滤层(4), 将上述固相酶标记物层(3)和渗滤层(4)置37℃或60℃烘干,固 相酶标记物、固相特异性抗原或抗体与海藻糖的重量比为1∶10-30。
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说明书

技术领域 本发明属于医学检验领域,特别是一种酶免疫渗滤检测用装置。
本发明还涉及该装置的制作方法。
背景技术 现有的酶免疫渗滤检测用装置,多采用将抗原或抗体直接点样于 硝酸纤维素膜上,待干燥后作为渗滤膜备用。
其制作方法是将配制好 的抗原或抗体溶液直接点样于硝酸纤维素膜上,然后置于室温干燥或 从硝酸纤维素膜的背面用真空抽干。
在硝酸纤维素膜的下面放置多层 吸水滤纸,再装于具有相应形状和大小的小盒中即可。
操作时,向渗 滤膜的点样处加入待检血清,待渗滤,然后加入液态的酶标记物,待 渗滤,3-5分钟后再加入洗涤液,待渗滤,共洗三遍,再加入显色 液显色。
斑点显色为阳性,斑点无色为阴性。
在被硝酸纤维素膜吸附 的样品的干燥过程中,如不加入稳定剂,常会造成点样液中抗原或抗 体发生不可逆的变性或活性的损失,影响了酶免疫渗滤检测装置的灵 敏度和特异性。
另外,该方法通常采用液态的酶标记抗原或抗体作为 酶标记物,这样不但影响了该酶免疫渗滤检测装置的稳定性和保存 期,而且使操作步骤增加。
不能很好的达到当今免疫学测定敏、准、 快、简的要求。
发明内容 本发明的任务是:提供一种灵敏度和准确度高并可长期稳定存放 的酶免疫渗滤检测用装置。
本发明还涉及上述装置的制作方法。
本发明是这样实现的: 酶免疫渗滤检测用装置,主要由盒体组成,盒体内自上而下设有 过滤扩展层、渗滤层和废液吸收层,其特征在于:在上述过滤扩展层 与渗滤层之间还设有一个酶标记物层。
酶标记物层为含有海藻糖稳定化的固相酶标记物的滤纸。
为了在过滤扩展层与渗滤层之间形成一个酶标记物层,本发明的 制作方法主要包括:提供一盒体,该盒体内自上而下设有过滤扩展层、 酶标记物层、渗滤层和废液吸收层,其特征在于:取固相酶标记物和 海藻糖加蒸馏水溶解为点样液,再取点样液点样于滤纸上得到固相酶 标记物层;将固相抗原或抗体加入海藻糖后再加适量蒸馏水后形成点 样液,将该点样液点样于硝酸纤维素膜上形成渗滤层,将上述固相酶 标记物层和渗滤层置37℃或60℃烘干,固相酶标记物、固相特异性 抗原或抗体与海藻糖的重量比为1∶10-30。
本发明由于增设了一个酶标记物层,只需一次加入血清或全血样 品即可洗涤显色,无须再加入液态酶标记物,操作简便快速,结果准 确可靠,易于观察,灵敏度和准确度高,并可长期(室温可保持1- 2年)稳定存放。
其室温稳定性可与金标渗滤法相媲美,适用于以三 明治夹心为原理的酶免疫渗滤法测定抗体或抗原,具有结构简单、操 作方便和灵敏、准确的优点,而且制备工艺简单,成本低廉。
附图说明 附图为本发明纵向拉长的剖面图。
附图中,1为盒体、2为过滤扩展层、3为酶标记物层、4为渗滤 层、5为废液吸收层。
具体实施方式 下面结合附图对本发明作进一步的详细描述。
如附图所示,本发明为一种酶免疫渗滤检测用装置,主要是由多 层滤纸和硝酸纤维素膜组成的多层盒式结构,最上层是过滤扩展层2, 为定性或定量滤纸,用于扩展血清或全血,还起过滤血球及其他颗粒 的作用。
第二层为酶标记物层3,其支持物为定性或定量滤纸,滤纸 上有稳定化的固相酶标记物,其制作方法是:先取1-10mg干重的 酶标记物和30-100mg海藻糖加1ml的蒸馏水溶解即为点样液,也 可以向含有1-10mg/ml酶标记物的溶液1ml中加入30-100mg的 海藻糖;然后取点样液1-2μl加于滤纸上呈圆点状或其他形状,最 后将点样滤纸置室温风干或37℃或60℃烘干即可。
第三层为渗滤层 4,其制作方法是:先取1-10mg干重的抗原或抗体和30-100mg海 藻糖,加1ml的蒸馏水溶解即为点样液,也可以向含有1-10mg/ ml抗原或抗体的1ml溶液中加入30-100mg的海藻糖。
然后取点样 液1-2μl加于硝酸纤维素膜上呈圆点状或其他形状,最后将点样硝 酸纤维素膜置室温风干或37℃或60℃烘干即可。
第四层为废液吸收 层5,主要由多层吸水滤纸或其他吸水材料组成。
以上各层以点样点 为中心切割成规定大小的圆形、方形或其他形状。
层与层之间按照上 述自上而下的顺序重叠并密切接触,然后将各层放入相应形状和大小 的小盒体1中,小盒的上部在点样的正上方有一区域为加样区,小盒 的中部在酶标记物层3和渗滤层4之间有一开启部,该开启部可设计 为一个拉链结构或其它易开结构,开启时可以将过滤扩展层2和酶标 记物层3一起揭开,使渗滤层4全部暴露,以利于观察结果,观察硝 酸纤维素膜上斑点的显色情况。
操作时,取5-10μl的待检血清或全血加入加样区中,待渗滤, 再取2-3滴洗涤液加入,待渗滤,5-10分钟后再加入2-3滴洗涤 液,待渗滤,共洗三遍,随后加入显色剂,待渗滤,最后开启结合部 观察结果,斑点显色为阳性,斑点无色为阴性(也可以开启后加洗涤 液,洗涤三遍,再加入显色剂显色)。
灵敏度和准确度高并可长期稳 定存放。
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