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一种河弧菌及用它生产褐藻胶裂合酶的方法

基本信息

  • 申请号 CN00111178.7 
  • 公开号 CN1137260C 
  • 申请日 2000/07/07 
  • 公开日 2004/02/04 
  • 申请人 青岛海洋大学  
  • 优先权日期  
  • 发明人 江晓路 管华诗 刘岩  
  • 主分类号  
  • 申请人地址 266003山东省青岛市鱼山路5号 
  • 分类号  
  • 专利代理机构 青岛海昊知识产权事务所有限公司 
  • 当前专利状态 发明专利权部分无效宣告的公告 
  • 代理人 崔清晨 
  • 有效性 有效专利 
  • 法律状态
  •  

权利要求书

1、一种河弧菌,其特征是它能生产褐藻胶裂合酶,保藏单位简称 CCTCC,保藏号为M200015。
2、一种用河弧菌生产褐藻胶裂合酶的方法,包括把菌放入含有褐藻酸钠的 发酵液中,在28℃培养18-24小时,然后投入(NH3)2SO4,产生沉淀, 再进行分离,最后冷冻干燥,其特征是所用的菌种为河弧菌,它的保藏 号为M200015。
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说明书

附图说明及具体实施方式 下面通过实施例说明本发明。
技术领域 本发明涉及一种河弧菌及用它生产褐藻胶裂合酶的方法。
背景技术 据本发明人所知,褐藻胶裂合酶在制备具有不同分子量并具有多种生物 活性的糖醛酸等方面显示出极其重要的作用,它对一些海洋药物的研制和工 业化生产有决定性的意义。
目前,已经有人用假单胞菌等生产褐藻胶裂合酶, 其中有的用褐藻酸钠或海藻制成发酵培养基液,在25℃摇瓶培养96小时, 然后投入提酶剂,使产品下沉,经分离冷冻干燥即可制得褐藻胶裂合酶。
这 些方法的缺点是制得的产品活性不高,稳定性差,成本高,难以实现工业化 生产。
这些缺点均与所用的菌种有关。
发明内容 本发明的目的是提供一种河弧菌及用它生产褐藻胶裂合酶的方法,它能 克服现有技术的上述缺点。
一种河弧菌,其特征是它能生产褐藻胶裂合酶,保藏单位简称CCTCC, 保藏号为M200015。
一种用河弧菌生产褐藻胶裂合酶的方法,包括把菌放入含有褐藻酸钠的发 酵液中,在28℃培养18-24小时,然后投入(NH3)2SO4,产生沉淀,再进行 分离,最后冷冻干燥,其特征是所用的菌种为河弧菌,它的保藏号为M200015。
本发明的菌种具有营养要求范围广,容易培养和代时短的特点,特别是 具有高的产酶活性,其发酵液中酶的比活力为30.72U/mg。
用本发明的方法 生产褐藻胶裂合酶,产品的活性高,稳定性好,成本低,能够实现工业化生 产。
附图为本发明的菌株形态图。
本发明的河弧菌(Vibrio fluvialis)菌株为弧形,端生单鞭毛,G-,菌 落圆形、乳白色,形态特征如附图所示。
培养河弧菌的方法是已知的,采用 的培养基为海水细菌培养基2216E,培养基的组份为酵母膏1克,蛋白胨5 克,磷酸高铁0.01克,琼脂15克,陈海水1000ml,其pH为7.6-7.8。
所 用的产酶培养基为上述培养基加入0.1%的褐藻酸钠,培养48小时即可得到 酶液。
其保藏单位为中国典型培养物保藏中心,简称CCTCC,地址:中国、 武汉、武汉大学;保藏日期:2000年6月5日;保藏号为M200015。
将本发明的菌种用2216E培养基活化后,以5%的接种量接入装有100ml 褐藻酸钠培养基的500ml三角瓶中,28℃摇瓶培养18-24h后,将该培养液 用冷冻离心机以4000rpm离心10分钟去除菌体,获得发酵酶液。
将该酶液 于4℃冰箱中先以30%的(NH4)2SO4去杂蛋白,冷冻离心后,将上清液继续 加入(NH4)2SO4至80%的饱和度,4℃下沉淀24h,冷冻离心收集沉淀,该 沉淀经冷冻干燥后制成粗的褐藻胶裂合酶制剂。
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