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缓释组合物、其制备方法和用途

基本信息

  • 申请号 CN00810405.0 
  • 公开号 CN1361685A 
  • 申请日 2000/07/13 
  • 公开日 2002/07/31 
  • 申请人 武田药品工业株式会社  
  • 优先权日期  
  • 发明人 猪狩康孝 畑善夫 山本一路  
  • 主分类号  
  • 申请人地址 日本大阪府 
  • 分类号  
  • 专利代理机构 北京市柳沈律师事务所 
  • 当前专利状态 发明专利申请公布 
  • 代理人 黄益芬 
  • 有效性 发明公开 
  • 法律状态
  •  

摘要

缓释组合物,含有生理活性物质或其盐、羟萘甲酸或其盐和乳酸-乙醇酸聚合物或其盐,其中该乳酸-乙醇酸聚合物的重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下;和含有这些缓释组合物的药物等。
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权利要求书

1、一种缓释组合物,它包含药理活性物质或其盐、羟萘甲酸或其 盐和乳酸-乙醇酸聚合物或其盐,其中所述乳酸-乙醇酸聚合物的重均分 子量乘以每单位质量(g)所述乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于 1,200,000以上3,000,000以下。
2、根据权利要求1的缓释组合物,其中该药理活性物质是生理活 性肽。
3、根据权利要求1的缓释组合物,其中该药理活性物质是LH-RH 衍生物。
4、根据权利要求1的缓释组合物,其中该羟萘甲酸是1-羟基-2-萘 甲酸或3-羟基-2-萘甲酸。
5、根据权利要求1的缓释组合物,其中该羟萘甲酸是1-羟基-2-萘 甲酸。
6、根据权利要求1的缓释组合物,其中乳酸与乙醇酸之间的%摩尔 比为100/0至40/60。
7、根据权利要求1的缓释组合物,其中乳酸与乙醇酸之间的%摩尔 比为100/0。
8、根据权利要求1的缓释组合物,其中该聚合物的重均分子量为 约3,000至约100,000。
9、根据权利要求8的缓释组合物,其中该重均分子量为约20,000 至约50,000。
10、根据权利要求3的缓释组合物,其中该LH-RH衍生物是由下 式代表的肽:5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z,其中Y表示 DLeu、DAla、DTrp、DSer(tBu)、D2Nal或DHis(ImBzl),Z表示NH-C2H5或Gly-NH2
11、根据权利要求1的缓释组合物,其中每单位质量(g)该聚合物的 末端羧基量(μmol)为50至90μmol。
12、根据权利要求3的缓释组合物,其中该羟萘甲酸或其盐与该 LH-RH衍生物或其盐之间的摩尔比为3∶4至4∶3。
13、根据权利要求3的缓释组合物,它包含以该缓释组合物为基础 的12重量%至24重量%的LH-RH衍生物或其盐。
14、根据权利要求1的缓释组合物,其中该生理活性物质或其盐是 一种微水溶性或水溶性物质。
15、根据权利要求1的缓释组合物,它是注射剂。
16、制备根据权利要求1的缓释组合物的方法,它包括从药理活性 物质或其盐、乳酸-乙醇酸聚合物或其盐与羟萘甲酸或其盐的混合物中除 去溶剂。
17、根据权利要求16的方法,它包括混合该药理活性物质或其盐与 该乳酸-乙醇酸聚合物或其盐和该羟萘甲酸或其盐在有机溶剂中的溶液, 分散该混合物,然后除去该有机溶剂。
18、根据权利要求16的方法,其中该药理活性物质或其盐是含有该 药理活性物质或其盐的水溶液。
19、根据权利要求16的方法,其中该药理活性物质的盐是与游离碱 或酸所生成的盐。
20、一种药物,包含根据权利要求1的缓释组合物。
21、含有根据权利要求3缓释组合物的一种抗前列腺癌、前列腺增 生、子宫内膜异位、子宫肌瘤、子宫纤维瘤、青春期早熟、痛经或乳腺 癌的预防或治疗剂、或一种避孕剂。
22、根据权利要求1的缓释组合物,其中该药理活性物质或其盐是 在至少6个月或更长的时期内释放的。
23、一种缓释组合物,包含药理活性物质或其盐、1-羟基-2-萘甲酸 或其盐和生物可降解聚合物或其盐。
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说明书

                       发明领域 本发明涉及药理活性物质的缓释制剂和其制备方法。
                       发明背景 JP-A-7-97334公开了一种缓释制剂及其制备方法,该制剂由生理活 性肽或其盐和具有末端游离羧基的生物可降解聚合物组成。
GB2209937、GB2234169、GB2234896、GB2257909和EP626170A2 各自公开了一种组合物及其制备方法,该组合物包含生物可降解聚合物 作为基质,并且含有肽或蛋白质的水不溶性盐,例如双羟萘酸盐,二者 是分别制备的。
WO95/15767公开了西曲瑞克(LH-RH拮抗剂)的扑酸盐(双羟萘酸盐) 和其制备方法,并且描述了这种双羟萘酸盐即使被封入生物可降解聚合 物内,其所表现出来的肽释放性能也等同于独立存在的双羟萘酸盐。
                      发明的公开 这里提供了含有高浓度生理活性物质的新颖组合物,其中抑制了生 理活性物质的过度的初期释放,由此实现长期(优选为约6个月或更长) 内稳定的释放速率。
本发明人为解决上述问题而进行了努力,最终发现:通过使生理活 性物质与羟萘甲酸共存于组合物中,能够向组合物中引入高浓度的生理 活性物质;通过向乳酸-乙醇酸聚合物内封入这两种组分,能够使生理活 性物质的释放速率不同于该生理活性物质在没有乳酸-乙醇酸聚合物的存 在下从生理活性物质与羟萘甲酸所形成的组合物中释放的速率;通过选 择乳酸-乙醇酸聚合物的特征和羟萘甲酸的量,能够控制这种释放速率; 即使在高浓度下也肯定能够抑制初期过度释放,由此实现在非常长时期 (优选为约6个月或更长)内的缓释;以及通过采用这样一种乳酸-乙醇酸 聚合物,其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基 量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下,能够提供进一步令人满意的 缓释制剂。
进一步努力结果完成了本发明。
因而,本发明提供: (1)一种缓释组合物,它包含药理活性物质或其盐、羟萘甲酸或其盐 和乳酸-乙醇酸聚合物或其盐,其中所述乳酸-乙醇酸聚合物的重均分子量 乘以每单位质量(g)所述乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于 1,200,000以上3,000,000以下; (2)根据上述(1)的缓释组合物,其中该药理活性物质是生理活性肽; (3)根据上述(1)的缓释组合物,其中该药理活性物质是LH-RH衍生 物; (4)根据上述(1)的缓释组合物,其中该羟萘甲酸是1-羟基-2-萘甲酸或 3-羟基-2-萘甲酸; (5)根据上述(1)的缓释组合物,其中该羟萘甲酸是1-羟基-2-萘甲酸; (6)根据上述(1)的缓释组合物,其中乳酸与乙醇酸之间的%摩尔比为 100/0至40/60; (7)根据上述(1)的缓释组合物,其中乳酸与乙醇酸之间的%摩尔比为 100/0; (8)根据上述(1)的缓释组合物,其中该聚合物的重均分子量为约3,000 至约100,000; (9)根据上述(8)的缓释组合物,其中该重均分子量为约20,000至约 50,000; (10)根据上述(3)的缓释组合物,其中该LH-RH衍生物是由下式代表 的肽:5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z,其中Y表示DLeu、 DAla、DTrp、DSer(tBu)、D2Nal或DHis(ImBzl),Z表示NH-C2H5或 Gly-NH2; (11)根据上述(1)的缓释组合物,其中每单位质量(g)该聚合物的末端 羧基量(μmol)为50至90μmol; (12)根据上述(3)的缓释组合物,其中该羟萘甲酸或其盐与该LH-RH 衍生物或其盐之间的摩尔比为3∶4至4∶3; (13)根据上述(3)的缓释组合物,它包含以该缓释组合物为基础的12 重量%至24重量%的LH-RH衍生物或其盐; (14)根据上述(1)的缓释组合物,其中该生理活性物质或其盐是一种微 水溶性或水溶性物质; (15)根据上述(1)的缓释组合物,它是注射剂; (16)一种制备根据上述(1)的缓释组合物的方法,它包括从药理活性物 质或其盐、乳酸-乙醇酸聚合物或其盐与羟萘甲酸或其盐的混合物中除去 溶剂; (17)根据上述(16)的方法,它包括混合该药理活性物质或其盐与该乳 酸-乙醇酸聚合物或其盐和该羟萘甲酸或其盐在有机溶剂中的溶液,分散 该混合物,然后除去该有机溶剂; (18)根据上述(16)的方法,其中该药理活性物质或其盐是含有该药理 活性物质或其盐的水溶液; (19)根据上述(16)的方法,其中该药理活性物质的盐是与游离碱或酸 所生成的盐; (20)一种药物,包含根据上述(1)的缓释组合物; (21)含有根据上述(3)的缓释组合物的一种抗前列腺癌、前列腺增生、 子宫内膜异位、子宫肌瘤、子宫纤维瘤、青春期早熟、痛经或乳腺癌的 预防或治疗剂、或一种避孕剂; (22)根据上述(1)的缓释组合物,其中该药理活性物质或其盐是在至少 6个月或更长的时间内释放的;和 (23)一种缓释组合物,包含药理活性物质或其盐、1-羟基-2-萘甲酸或 其盐和生物可降解聚合物或其盐。
此外,本发明提供: (24)一种制备根据上述(16)的缓释组合物的方法,它包括制备w/o乳 剂,该乳剂具有含有该生理活性物质或其盐的液体作为内部水相,和具 有含该乳酸-乙醇酸或其盐和该羟萘甲酸或其盐的溶液作为油相,然后除 去溶剂; (25)一种制备根据上述(16)的缓释组合物的方法,它包括制备w/o乳 剂,该乳剂具有含该羟萘甲酸或其盐的液体作为内部水相,和具有含该 生理活性物质或其盐和该乳酸-乙醇酸或其盐的溶液作为油相,然后除去 溶剂; (26)一种制备根据上述(16)的缓释组合物的方法,它包括混合该药理 活性物质或其盐与该羟萘甲酸或其盐,溶解该混合物,然后除去该有机 溶剂;和 (27)根据上述(24)至(26)中任一项的制备缓释组合物的方法,其中用 于除去该溶剂的过程是一种水中干燥方法。
用在本发明中的生理活性物质没有特别限制,只要它是制药可用的 即可,并且它可以是非肽化合物或肽化合物。
非肽化合物例如可以是激 动剂、拮抗剂和对酶具有抑制作用的化合物。
优选的肽化合物实例是生 理活性肽,其分子量为约300至约40,000,优选为约400至约30,000, 更优选为约500至约20,000。
这样的生理活性肽例子可以是促黄体激素释放激素(LH-RH)、胰岛素、 促生长素抑制素、生长激素、生长激素释放激素(GH-RH)、催乳激素、红 细胞生成素、肾上腺皮质激素、促黑素细胞激素、甲状腺激素-释放激素、 促甲状腺激素、促黄体激素、促卵泡成熟激素、后叶加压素、催产素、降 钙素、胃泌素、促胰液素、促胰酶素、缩胆囊肽、血管紧张肽、人胎盘生 乳素、人绒毛膜促性腺素、脑啡肽、内啡肽、“KYOTORPHIN”、他福新、 胸腺生成素、胸腺素、“THYMOTHYMRIN”、胸腺体液因子、血液胸腺因 子、肿瘤坏死因子、集落诱导因子、胃动素、“DEINORPHINE”、铃蟾肽、 神经降压素、蛙皮素、缓激肽、心钠利尿因子、神经生长因子、细胞生长 因子、神经营养因子、内皮拮抗肽和它们的衍生物以及它们的片段及其 衍生物。
本发明中,可以采用生理活性物质本身或其药学上可接受的盐。
具有碱性基团例如氨基的生理活性物质的盐例如可以是与无机酸(也 称无机游离酸)(例如碳酸、重碳酸、盐酸、硫酸、硝酸、硼酸等)和有机 酸(也称有机游离酸)(例如琥珀酸、乙酸、丙酸、三氟乙酸等)所生成的盐。
具有酸性基团例如羧基的生理活性物质的盐例如可以是与无机碱(也 称无机游离碱)(例如碱金属如钠和钾,碱土金属如钙和镁)或与有机碱(也 称有机游离碱)(例如有机胺如三乙胺,碱性氨基酸如精氨酸)所生成的 盐。
生理活性肽可以生成金属配位化合物(例如铜配合物、锌配合物等)。
这类生理活性肽的优选实例是这样的LH-RH衍生物或其盐,它可 用于治疗激素依赖性疾病,尤其是性激素依赖性癌症(例如前列腺癌、子 宫癌、乳腺癌、垂体癌等)、性激素依赖性疾病(例如前列腺增生、子宫 内膜异位、子宫肌瘤、青春期早熟、痛经、经闭、经前期综合征、多腔 性卵巢综合征等),并且可用作避孕剂(或者在节育后利用回弹作用抗不 育症)。
也例如这样的LH-RH衍生物或其盐,它可用于治疗良性或恶性 肿瘤,该肿瘤不是性激素依赖性的,而是LH-RH敏感性的。
通常,LH-RH衍生物或其盐例如可以是下面文献中所述肽:《GnRH 类似物治疗:争论与透视》The Parthenon Publishing Group Ltd.,(1996)、 JP-W-3-503165、JP-A-3-101695、7-93774和8-259460。
LH-RH衍生物例如可以是LH-RH激动剂或LH-RH拮抗剂,后者例 如可以是由式[I]代表的药理活性肽或其盐:     X-D2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-A-B-Leu-C-Pro-DAlaNH2 其中X表示N(4H2-糠酰)Gly或NAc,A表示选自NMeTyr、Tyr、Aph(Atz) 和NMeAph(Atz)的残基,B表示选自DLys(Nic)、DCit、DLys(AzaglyNic)、 DLys(AzaglyFur)、DhArg(Et2)、DAph(Atz)和DhCi的残基,C表示 Lys(Nisp)、Arg或hArg(Et2)。
LH-RH激动剂例如可以是由式[II]代表的药理活性肽或其盐:           5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z 其中Y表示选自DLeu、DAla、DTrp、DSer(tBu)、D2Nal和DHis(ImBzl) 的残基,Z表示NH-C2H5或Gly-NH2
尤其优选的一种是其中Y是DLue、 Z是NH-C2H5的肽(也就是由5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLue-Leu-Arg- Pro-NH-C2H5代表的肽)。
这些肽中任一种都可以按照前述参考文献和专利说明书所述方法及 其相应方法加以制备。
本文所用的缩写列在下面。
缩写                                  名称 N(4H2-糠酰)Gly                        N-四氢糠酰甘氨酸残基 NAc                                   N-乙酰基 D2Nal                                 D-3-(2-萘基)丙氨酸残基 D4ClPhe                               D-3-(4-氯)苯丙氨酸残基 D3Pal                            D-3-(3-吡啶基)丙氨酸残基 NMeTyr                           N-甲基酪氨酸残基 Aph(Atz)                         N-[5’-(3’-氨基-1’H-1’,2’,4’-三唑基)]苯丙氨                              酸残基 NmeAph(Atz)                      N-甲基-[5’-(3’-氨基-1’H-1’,2’,4’-三唑基)]                              苯丙氨酸残基 DLys(Nic)                        D-(e-N-烟酰)赖氨酸残基 Dcit                             D-瓜氨酸残基 DLys(AzaglyNic)                  D-(氮杂甘氨酰烟酰)赖氨酸残基 DLys(AzaglyFur)                  D-(氮杂甘氨酰呋喃基)赖氨酸残基 DhArg(Et2)                      D-(N,N’-二乙基)高精氨酸残基 Daph(Atz)                        D-N-[5’-(3’-氨基-1’H-1’,2’,4’-三唑基)]苯                              丙氨酸残基 DhCi                             D-高瓜氨酸残基 Lys(Nisp)                        (e-N-异丙基)赖氨酸残基 hArg(Et2)                       (N,N’-二乙基)高精氨酸残基 DSer(tBu)                        O-叔丁基-D-丝氨酸 Dhis(ImBzl)                      Nim-苄基-D-组氨酸 按另一种方式,氨基酸当以缩写表示时,参见IUPAC-IUB生物化 学命名委员会、《欧洲生物化学杂志》138卷9至37页(1984)或者参照本 领域的惯例,而氨基酸当存在旋光异构体时,意味着L型,另有指定除 外。
用在本发明中的羟萘甲酸是在不同的碳原子上键合一个羟基和一个 羧基的萘。
因此,总共有14种异构体,它们在关于羧基与萘环键合的 每个1-位和2-位的羟基位置上是彼此不同的。
本发明可以采用这些异构 体中任一种,也可以采用它们的任意比例的混合物。
如下所述,酸离解 常数较高者是优选的,或者pKa(pKa=-log10Ka,其中Ka是酸离解常数) 较低者是优选的。
微水溶性异构体是优选的。
还优选的是可溶于醇(例如乙醇和甲醇)的异构体。
“可溶于醇”是指 溶解度,例如在甲醇中的溶解度是10g/L或更高。
尽管在羟萘甲酸异构体中3-羟基-2-萘甲酸的pKa(pKa=2.708, KAGAKUBINRAN,II,日本化学会,1969年9月25日出版)是唯一已知的 pKa,但比较羟基苯甲酸的三种异构体之间的pKa可以给出有用的信息。
因而,间-羟基苯甲酸和对-羟基苯甲酸的pKa是4或更高,而邻-羟基苯 甲酸(水杨酸)的pKa低得多(=2.754)。
因此,在上述14种异构体中,羧 基与羟基各自与萘环中相邻碳原子键合的3-羟基-2-萘甲酸、1-羟基-2-萘 甲酸和2-羟基-1-萘甲酸是优选的。
羟萘甲酸可以是一种盐。
这样的盐例如可以是与无机碱(例如碱金属 如钠和钾,碱土金属如钙和镁)、有机碱(例如有机胺如三乙胺,碱性氨基 酸如精氨酸)或过渡金属(例如锌、铁、铜)所生成的盐以及配盐。
下面描述制备本发明的药学活性物质羟萘甲酸盐的方法实例。
(1)将 羟萘甲酸在水合有机溶剂中的溶液装上弱碱型离子交换柱并被其吸附, 直至饱和。
随后,加入该水合有机溶剂,以除去过量羟萘甲酸,然后加 入生理活性物质或其盐在水合有机溶剂中的溶液,进行离子交换,除去 所得洗脱液中的溶剂。
这样的水合有机溶剂含有醇(例如甲醇、乙醇)、乙 腈、四氢呋喃、二甲基甲酰胺等作为有机溶剂。
除去溶剂使盐沉淀的方 法可以是本身已知的方法或其相应方法。
例如,利用旋转蒸发器并调节 真空水平,蒸发除去溶剂。
(2)强碱型离子交换柱的交换离子先前已经被 氢氧化物离子所代替,然后装入生理活性物质或其盐在水合有机溶剂中 的溶液,由此碱性基团交换为氢氧化物。
所回收的洗脱液用于溶解少于 当量的羟萘甲酸,浓缩使盐沉淀,如果必要的话用水洗涤后干燥。
尽管溶解度可能因所用生理活性物质而异,但由于生理活性物质的 羟萘甲酸盐是微水溶性的,因此利用该生理活性肽盐本身的缓释能力, 可以作为缓释制剂使用,或者可以进一步配制成缓释组合物。
用在本发明中的乳酸-乙醇酸聚合物是这样一种乳酸-乙醇酸聚合物, 其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol) 等于1,200,000以上3,000,000以下,优选为1,500,000以上2,600,000以 下,优选采用具有末端游离羧基者。
乳酸-乙醇酸聚合物可以是盐的形式。
这样的盐例如可以是与无机碱 (例如碱金属如钠和钾,碱土金属如钙和镁)、有机碱(例如有机胺如三乙 胺,碱性氨基酸如精氨酸)或过渡金属(例如锌、铁、铜)所生成的盐以及 配盐。
该聚合物的乳酸与乙醇酸之间的%摩尔比优选为约100/0至约 40/60,更优选为约100/0至约50/50。
还优选采用其%摩尔比为100/0的 乳酸均聚物。
作为上述“乳酸-乙醇酸聚合物”的最小重复单元之一的乳酸的旋光 异构体比以D-型/L-型(%mol/mol)表示,优选为约75/25至约25/75。
经 常采用D-型/L-型(%mol/mol)之比尤其为约60/40至约30/70的那些。
上述“乳酸-乙醇酸聚合物”的重均分子量通常为约3,000至约 100,000,优选为约3,000至约60,000,更优选为约3,000至约50,000, 尤其为约20,000至约50,000。
本发明的乳酸-乙醇酸聚合物例如可以是这样一种聚合物,其重均分 子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于 1,200,000以上3,000,000以下,更优选为这样一种聚合物,其重均分子 量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于 1,500,000以上2,600,000以下。
多分散性(重均分子量/数均分子量)通常为约1.2至约4.0,优选为约 1.5至约3.5,更优选为约1.7至约3.0。
每单位质量(g)上述“乳酸-乙醇酸聚合物”的游离羧基量通常为约20 至约1000μmol,更优选为约40至约1000μmol。
进一步优选的量为约40 至约95μmol,尤其为约50至约90μmol。
优选的实例是: (1)一种乳酸-乙醇酸聚合物,其重均分子量为约3,000至约100,000, 其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol) 等于1,200,000以上3,000,000以下; (2)一种乳酸-乙醇酸聚合物,其重均分子量为约3,000至约60,000, 其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol) 等于1,200,000以上3,000,000以下; (3)一种乳酸-乙醇酸聚合物,其重均分子量为约3,000至约50,000, 其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol) 等于1,200,000以上3,000,000以下; (4)一种乳酸-乙醇酸聚合物,其重均分子量为约20,000至约50,000, 其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol) 等于1,200,000以上3,000,000以下; (5)一种乳酸-乙醇酸聚合物,其每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的 末端羧基量(μmol)为约20至约1000μmol,其重均分子量乘以每单位质 量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上 3,000,000以下; (6)一种乳酸-乙醇酸聚合物,其每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的 末端羧基量(μmol)为约40至约1000μmol,其重均分子量乘以每单位质 量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上 3,000,000以下; (7)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其重均分子量为约3,000至约 100,000,[2]其每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)为 约20至约1000μmol,且[3]其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇 酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下; (8)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其重均分子量为约3,000至约 100,000,[2]其每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)为 约40至约1000μmol,且[3]其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇 酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下; (9)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其重均分子量为约3,000至约 60,000,[2]其每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)为约 20至约1000μmol,且[3]其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚 合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下; (10)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其重均分子量为约3,000至约 60,000,[2]其每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)为约 40至约1000μmol,且[3]其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚 合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下; (11)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其重均分子量为约3,000至约 50,000,[2]其每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)为约 20至约1000μmol,且[3]其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚 合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下; (12)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其重均分子量为约3,000至约 50,000,[2]其每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)为约 40至约1000μmol,且[3]其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚 合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下; (13)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其重均分子量为约20,000至约 50,000,[2]其每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)为约 20至约1000μmol,且[3]其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚 合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下;和 (14)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其重均分子量为约20,000至约 50,000,[2]其每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)为约 40至约1000μmol,且[3]其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚 合物的末端羧基量(μmol)等于1,200,000以上3,000,000以下。
更优选的实例是: (15)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其重均分子量为约3,000至约 100,000,[2]其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端 羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下; (16)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其重均分子量为约3,000至约 60,000,[2]其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端 羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下; (17)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其重均分子量为约3,000至约 50,000,[2]其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端 羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下; (18)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其重均分子量为约20,000至约 50,000,[2]其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端 羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下; (19)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合 物的末端羧基量(μmol)为约20至约1000μmol,[2]其重均分子量乘以每 单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上 2,600,000以下; (20)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合 物的末端羧基量(μmol)为约40至约1000μmol,[2]其重均分子量乘以每 单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上 2,600,000以下; (21)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其重均分子量为约3,000至约 100,000,[2]其每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)为 约20至约1000μmol,且[3]其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇 酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下; (22)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其重均分子量为约3,000至约 100,000,[2]其每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)为 约40至约1000μmol,且[3]其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇 酸聚合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下; (23)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其重均分子量为约3,000至约 60,000,[2]其每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)为约 20至约1000μmol,且[3]其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚 合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下; (24)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其重均分子量为约3,000至约 60,000,[2]其每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)为约 40至约1000μmol,且[3]其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚 合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下; (25)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其重均分子量为约3,000至约 50,000,[2]其每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)为约 20至约1000μmol,且[3]其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚 合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下; (26)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其重均分子量为约3,000至约 50,000,[2]其每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)为约 40至约1000μmol,且[3]其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚 合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下; (27)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其重均分子量为约20,000至约 50,000,[2]其每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)为约 20至约1000μmol,且[3]其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚 合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下;和 (28)一种乳酸-乙醇酸聚合物,[1]其重均分子量为约20,000至约 50,000,[2]其每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚合物的末端羧基量(μmol)为约 40至约1000μmol,且[3]其重均分子量乘以每单位质量(g)乳酸-乙醇酸聚 合物的末端羧基量(μmol)等于1,500,000以上2,600,000以下。
重均分子量、数均分子量和多分散性是指利用15种单分散聚苯乙 烯作为标准通过凝胶渗透色谱法(GPC)测定的聚苯乙烯的分子量和从它 们计算的多分散性,这15种重均分子量为1,110,000、707,000、455,645、 354,000、189,000、156,055、98,900、66,437、37,200、17,100、9,830、 5,870、2,500、1,303和504。
测定是利用高速GPC仪器(TOSO,HLC- 8120GPC,通过示差折光率检测)以及GPC柱KF804Lx2(SHOWA DENKO)进行的,氯仿为移动相。
流速为1ml/min。
这里所述游离羧基的量是指通过标记方法测定的量(以下称为基于标 记法的羧基水平)。
通常,在聚乳酸的情况下,将Wmg聚乳酸溶于5N 盐酸/乙腈的2ml混合物(v/v=4/96),与2ml 0.01M盐酸邻-硝基苯肼 (ONPH)溶液(5N盐酸/乙腈/乙醇=1.02/35/15)和2ml 0.15M盐酸1-乙基- 3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺溶液(吡啶/乙醇=4v/96v)混合,使混合物在 40℃下反应30分钟,然后蒸馏除去溶剂。
将残余物用水洗涤(4次),溶 于2ml乙腈,与1ml 0.5mol/L氢氧化钾的乙醇溶液混合,在60℃下反应 30分钟。
将反应混合物用1.5N氢氧化钠水溶液稀释至Yml,检查在544nm 下的吸光度A(/cm),使用1.5N氢氧化钠水溶液作为参考标准。
另一方 面,使用DL-乳酸水溶液作为标准,借助碱性滴定检查它的游离羧基C mol/L,并用ONPH标记法转化为DL-乳酰肼,然后检查在544nm下的 吸光度B(/cm),基于这些,按照下列等式计算每单位质量(g)聚合物的 游离羧基的摩尔量。
              [COOH](mol/g)=(AYC)/(WB) 该“羧基的量”也可以这样获得,将乳酸-乙醇酸聚合物溶于甲苯- 丙酮-甲醇的溶剂混合物,用氢氧化钾的乙醇溶液滴定所得溶液的羧基, 使用酚酞作为指示剂(以下,通过这种方法所得数值称为“基于碱性滴定 的羧基水平”)。
尽管乳酸-乙醇酸聚合物降解与消失的速率在很大程度上因共聚物的 组成、分子量或游离羧基水平而异,不过由于它通常随着乙醇酸比例的 减少而降低,因此有可能借助减少乙醇酸比例或者增加分子量同时降低 游离羧基水平,而延长释放的持续时间。
这样的“乳酸-乙醇酸聚合物”例如可以通过非催化的脱水性缩合聚 合作用(JP-A-61-28521)从乳酸和乙醇酸加以制备,或者通过开环聚合作 用从环状二酯化合物例如丙交酯类和乙交酯类加以制备(《生物材料与生 物工程百科全书A部:材料》第2卷,Marcel Dekker,Inc,1995)。
尽管通 过上述已知的开环聚合作用所得聚合物有时可能是在其末端没有游离羧 基的聚合物,不过这样的聚合物在使用前能够转化为每单位质量具有一 定数量羧基的聚合物,例如借助水解作用,如EP-A-0839525所述。
“具有末端游离羧基的乳酸-乙醇酸聚合物”容易通过已知方法(例 如非催化的脱水性缩合聚合作用,JP-A-61-28521)或下列方法加以制备。
(1)首先,在羧基被保护的羟基一元羧酸衍生物(例如叔丁基D-乳酸 酯、苄基L-乳酸酯)或羧基被保护的羟基二元羧酸衍生物(例如二苄基丙 醇二酸酯、二叔丁基二羟乙基丙二酸酯)的存在下,用聚合催化剂使环酯 化合物进行聚合作用。
上述“羧基被保护的羟基一元羧酸衍生物”或“羧基被保护的羟基 二元羧酸衍生物”例如可以是其羧基(-COOH)被酰胺化(-CONH2)或酯化 (-COOR)的羟基羧酸衍生物,其中其羧基(-COOH)被酯化(-COOR)的羟基 羧酸衍生物是优选的。
这里所述酯中的R例如可以是C1-6烷基,例如甲基、乙基、正丙基、 异丙基、正丁基和叔丁基,C3-8环烷基,例如环戊基和环己基,C6-12芳 基,例如苯基和α-萘基,C7-14芳烷基,包括苯基-C1-2烷基,例如苄基和 苯乙基,或α-萘基-C1-2烷基,例如α-萘甲基。
在上面列举的那些当中, 叔丁基和苄基是优选的。
上述“环酯化合物”例如可以是环内具有至少一条酯键的环状化合 物。
通常例如环状单酯化合物(内酯)和环状二酯化合物(交酯)。
上述“环状单酯化合物”例如可以是4-元环状内酯(β-丙内酯、β-丁 内酯、β-异戊内酯、β-己内酯、β-异己内酯、β-甲基-β-戊内酯等)、5-元 环状内酯(γ-丁内酯、γ-戊内酯等)、6-元环状内酯(δ-戊内酯等)、7-元环状 内酯(ε-己内酯等)、对-二噁烷酮、1,5-二氧杂环庚烷-2-酮等。
上述“环状二酯化合物”例如可以是由下式代表的化合物: 其中R1和R2是相同或不同的,各自表示氢原子或C1-6烷基(例如甲基、 乙基、正丙基、异丙基、正丁基和叔丁基),和交酯,其中R1是氢原子, R2是甲基,或者每个R1和R2都是氢原子。
那些具有代表性的例子是乙交酯、L-交酯、D-交酯、DL-交酯、内 消旋交酯、3-甲基-1,4-二噁烷-2,5-二酮(包括旋光异构体)等。
上述“聚合催化剂”例如可以是有机锡类催化剂(例如辛酸锡、二月 桂酸二正丁基锡、四苯基锡)、铝类催化剂(例如三乙基铝)和锌类催化剂(例 如二乙基锌)。
出于在反应后容易除去溶剂的目的,铝类和锌类催化剂是优选的, 而出于确保残留催化剂(如果有的话)的安全性的目的,锌类催化剂是优 选的。
聚合催化剂的溶剂是苯、己烷、甲苯等,其中己烷和甲苯是尤其优 选的。
“聚合方法”可以是本体聚合,其中使用熔化了的反应物,或者是 溶液聚合,其中采用溶解在适当溶剂(例如苯、甲苯、二甲苯、十氢萘和 二甲基甲酰胺)中的反应物。
优选的溶剂是甲苯、二甲苯等。
尽管聚合温 度没有特别的限制,不过本体聚合可以采用能够在反应初期熔化反应物 的温度或更高,通常为100至300℃,而溶液聚合通常采用室温至150 ℃,并使用冷凝器用于回流,或者当反应温度超过反应溶液的沸点时使 用耐压反应器。
尽管反应时间可以因聚合温度、其他反应条件和目标聚 合物的特征而异,但一般说可以是10分钟至72小时。
反应后,按照标 准方法,将反应混合物溶于适当溶剂(例如丙酮、二氯甲烷、氯仿),与 酸混合(例如盐酸、乙酸酐、三氟乙酸)以终止聚合作用,然后沉淀,例 如与不溶解目标产物的溶剂(例如乙醇、水、乙醚、异丙醚)混合,由此 分离在其ω-末端具有被保护的羧基的乳酸-乙醇酸聚合物。
根据本发明的聚合方法采用羧基被保护的羟基羧酸衍生物(例如叔丁 基D-乳酸酯、苄基L-乳酸酯)或羧基被保护的羟基二元羧酸衍生物(例如 二苄基丙醇二酸酯、二叔丁基二羟乙基丙二酸酯)代替质子链转移剂,例 如常用的甲醇。
使用这样的羧基被保护的羟基羧酸衍生物(例如叔丁基D-乳酸酯、 苄基L-乳酸酯)或羧基被保护的羟基二元羧酸衍生物(例如二苄基丙醇二 酸酯、二叔丁基二羟乙基丙二酸酯)作为质子链转移剂,[1]有可能在输 入组成的基础上控制分子量,[2]聚合之后的去保护可以使所得乳酸-乙 醇酸聚合物的ω-末端羧基游离。
(2)随后,将通过上述(1)聚合作用所得在其ω-末端具有被保护的羧基 的乳酸-乙醇酸聚合物去保护,得到在其ω-末端具有游离羧基的目标乳酸 -乙醇酸聚合物。
保护基团可以通过本身已知的方法去保护。
该方法可以是任意的方 法,只要它能够除去保护基团而不对聚(羟基羧酸)的酯键产生不利影响 即可,不过通常可以是还原、酸分解等。
还原方法例如可以是用催化剂(例如钯-碳、钯黑、氧化铂)进行催化 氢化、在液铵中用钠还原和用二硫苏糖醇还原。
在例如在其ω-末端具有 被苄基保护的羧基的聚合物被催化氢化的情况下,将通常溶于乙酸乙 酯、二氯甲烷、氯仿等的聚合物与钯-碳混合,通入氢气,同时在室温下 剧烈搅拌约20分钟至约4小时,由此实现去保护。
酸分解例如可以是用无机酸(例如氟化氢、溴化氢、氯化氢)或有机 酸(例如三氟乙酸、甲磺酸、三氟甲磺酸)及其混合物进行酸分解。
如果 必要的话,酸分解可以在阳离子清除剂(例如茴香醚、苯酚、茴香硫醚) 的存在下进行。
例如在其ω-末端具有被叔丁基保护的羧基的聚合物进行 酸分解的情况下,将通常溶于二氯甲烷、二甲苯、甲苯等的聚合物与适 量三氟乙酸混合,或者将聚合物溶于三氟乙酸,然后将混合物在室温下 搅拌约1小时,由此实现去保护。
酸分解也优选可以在聚合反应之后立即进行,在这种情况下,它也 充当聚合终止反应。
而且如果必要的话,通过上述去保护所得乳酸-乙醇酸聚合物可以进 行酸水解,以根据需要调整重均分子量、数均分子量或末端羧基水平。
通常,可以采用EP-A-0839525所述方法或其相应方法。
上述所得乳酸-乙醇酸聚合物可以作为基质,用于制备缓释制剂。
在其末端具有非特异性游离羧基的聚合物可以通过已知方法(例如参 见WO94/15587)加以制备。
此外,在开环聚合后其末端已经借助化学处理转化为游离羧基的乳 酸-乙醇酸聚合物可从市场上买到,例如Boehringer Ingelheim KG的产 品。
乳酸-乙醇酸聚合物可以以盐的形式(例如上面列举的那些)存在,盐 例如可以通过下列方法制备,(a)将溶于有机溶剂的上述具有羧基的乳酸 -乙醇酸聚合物与含有无机碱(例如碱金属如钠和钾,碱土金属如钙和镁) 的水溶液或与有机碱(例如有机胺如三乙胺,碱性氨基酸如精氨酸)混合, 进行离子交换反应,然后分离聚合物的盐,(b)将上述(a)列举的碱的弱酸 盐(例如乙酸盐和羟乙酸盐)溶于上述具有羧基的乳酸-乙醇酸聚合物在有 机溶剂中的溶液,然后分离乳酸-乙醇酸聚合物的盐形式,(c)将溶于有 机溶剂的上述具有羧基的乳酸-乙醇酸聚合物与过渡金属(例如锌、铁、 铜)的弱酸盐(例如乙酸盐和羟乙酸盐)或氧化物混合,然后分离乳酸-乙醇 酸聚合物的盐形式。
尽管本发明组合物中药理活性物质的重量比可以因药理活性物质类 型、其所需的药理作用和持续时间而异,但在生理活性肽或其盐的情况 下,对于该生理活性物质或其盐、羟萘甲酸或其盐和乳酸-乙醇酸聚合物 或其盐的总量而言,当这三种组分包含在缓释组合物中时,该重量比是 约0.001至约50重量%,优选为约0.02至约40重量%,更优选为约0.1 至30重量%,最优选为约12至24重量%,而在非肽生理活性物质或其 盐的情况下,该重量比是约0.01至约80重量%,优选为约0.1至约50 重量%。
即使当含有生理活性物质和羟萘甲酸时,类似的重量比范围也 是适用的。
在缓释组合物包含生理活性肽(这里称为(A))与羟萘甲酸(这里 称为(B))的盐的情况下,基于(A)+(B)的总量而言,(A)的重量比通常为 约5至约90重量%,优选为约10至约85重量%,更优选为约15至约80 重量%,尤其为约30至约80重量%。
在缓释组合物含有三种组分的情况下,也就是生理活性物质或其 盐、羟萘甲酸或其盐和乳酸-乙醇酸聚合物或其盐,每1摩尔生理活性物 质或其盐的羟萘甲酸或其盐的量为约1/2至约2摩尔,优选为约3/4至 约4/3摩尔,尤其为约4/5至约6/5摩尔。
下面,讨论设计本发明组合物的程序,针对含有三种组分的缓释组 合物,也就是生理活性物质、羟萘甲酸和乳酸-乙醇酸聚合物,其中生理 活性物质是碱性物质。
在这种情况下,该组合物含有生理活性物质作为 碱,及含有羟萘甲酸作为酸,无论以游离形式还是盐的形式结合在组合 物中,它们均各自在组合物制备期间的任意时间点以水合状态或者在痕 量水的存在下建立其离解平衡。
尽管溶解度可以因所用生理活性物质而 异,不过由于微水溶性羟萘甲酸与生理活性物质一起所生成的盐被认为 是微水溶性的,因此离解平衡有利于该微水溶性盐的生成。
为了制备含有高浓度碱性生理活性物质的组合物,鉴于上面所讨论 的离解平衡,优选的是质子化几乎所有生理活性物质,以生成上述微水 溶性盐。
为此,优选的是加入羟萘甲酸或其盐的量至少几乎等于生理活 性物质或其盐。
下面讨论组合物所含有的生理活性物质的缓释机理。
生理活性物质 大部分已被质子化,与伴生的抗衡离子共存于上述组合物中。
抗衡离子 主要是羟萘甲酸。
组合物对活体给药后,乳酸-乙醇酸聚合物发生降解, 生成其低聚物和单体,每种所得低聚物(乳酸-乙醇酸低聚物)和单体(乳酸 或乙醇酸)肯定具有一个羧基,该羧基也能够充当生理活性物质的抗衡离 子。
尽管生理活性物质是以没有电荷转移的方式释放的,也就是说,它 是以盐的形式伴随抗衡离子释放的,可转移的抗衡离子种类例如可以是 羟萘甲酸、乳酸-乙醇酸低聚物(具有可转移的分子量)和单体(乳酸或乙醇 酸)。
当同时存在两种或多种酸时,一般主要与强酸生成盐,不过这种主 导地位可以因其比例而变化。
关于羟萘甲酸的pKa,例如3-羟基-2-萘甲 酸的pKa是2.708(KAGAKUBINRAN,II,日本化学会,1969年9月25日 出版)。
另一方面,乳酸-乙醇酸低聚物羧基的pKa是未知的,但是按照 “引入取代基所致自由能的改变可以在附加规则的基础上取近似值”的 原理,它是能够从乳酸或乙醇酸的pKa(=3.86或3.83)计算出来的。
测定 取代基对离解常数的贡献,可以加以利用(表4.1,《有机酸与碱的pKa预 测》,D.D.Perrin,B.Dempsey,E.P.Sergeant,1981)。
羟基和酯键的pKa 如下: ΔpKa(OH)=-0.90 ΔpKa(酯键)=-1.7 因此,考虑最接近被离解基团的酯键的贡献,乳酸-乙醇酸低聚物羧 基的pKa如下: pKa=pKa(乳酸或乙醇酸)-ΔpKa(OH)+ΔpKa(酯键)=3.06或3.03 因此,羟萘甲酸的酸性强于乳酸(pKa=3.86)、乙醇酸(pKa=3.83)和 乳酸-乙醇酸低聚物(pKa=3.83),因而有可能在上述组合物中主要生成 羟萘甲酸与生理活性物质的盐,并且盐的特征主要决定了生理活性物质 从组合物中缓释的曲线。
这里所采用的生理活性物质例如可以是上面提 到的生理活性物质。
本文中,从羟萘甲酸与生理活性物质所生成的盐是微水溶性而非水 不溶性这一事实有利于缓释机理。
因而,正如上述关于酸离解常数的讨 论所证明的,由于在释放的早期阶段,在可转移的生理活性物质盐中主 要存在酸性强于乳酸-乙醇酸低聚物和单体的羟萘甲酸的盐,使盐的溶解 度和组织分布性能成为生理活性物质释放速率的决定因素,因此,该物 质的初期释放模式可以在羟萘甲酸的加入量的基础上加以调整。
随后, 作为乳酸-乙醇酸聚合物水解的结果,羟萘甲酸减少,并且所生成的低聚 物和单体增加,以低聚物和单体作为抗衡离子的生理活性物质的释放机 理逐渐占主导地位,由此即使在羟萘甲酸从上述“组合物”中基本耗尽 之后,生理活性物质也保持稳定释放。
类似地可以解释在缓释组合物制 造过程期间结合生理活性物质的效率和在所结合的生理活性物质给药之 后抑制初期过度释放的能力如何提高。
上述机理还类似地解释了羟萘甲酸在含有生理活性肽的羟萘甲酸盐 的缓释组合物中所起的作用。
这里所用的术语“水不溶性”是指在蒸馏水中,在40℃或更低的温 度下,将所述物质搅拌4小时后,溶于1L溶液的物质质量为25mg或更 少。
这里所用的术语“微水不溶性”是指上述质量大于25mg且不大于 5g。
若有关物质是生理活性物质的盐,则在上述程序中所溶解的生理活 性物质质量适用于上述定义。
尽管本发明缓释组合物的形态没有特别的限制,不过优选为微粒 体,尤其是微球体(在缓释组合物含有乳酸-乙醇酸聚合物的情况下,也 称微胶囊)。
这里所述微球体是指能够分散在溶液中的可注射球形微粒 体。
验证形态例如可以利用扫描电子显微镜进行观察。
用于制备包含药理活性物质或其盐、羟萘甲酸或其盐和乳酸-乙醇酸 聚合物或其盐的本发明缓释组合物的方法如下所述,以微胶囊为例。
(I)包水(in-water)干燥方法 (i)O/W法 该方法中,首先制备羟萘甲酸或其盐和乳酸-乙醇酸聚合物或其盐在 有机溶剂中的溶液。
用于制备本发明缓释制剂的有机溶剂优选地具有120 ℃或更低的熔点。
这样的有机溶剂例如可以是卤代烃(例如二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、 三氯乙烷、四氯化碳)、醚(例如乙醚、异丙醚)、脂肪酸酯(例如乙酸乙酯、 乙酸丁酯)、芳族烃(例如苯、甲苯、二甲苯)、醇(例如乙醇、甲醇)以及 乙腈。
作为用于乳酸-乙醇酸聚合物或其盐的有机溶剂,二氯甲烷是尤其 优选的。
作为用于羟萘甲酸或其盐的有机溶剂,醇或醇与卤代烃的混合物是 尤其优选的。
羟萘甲酸或其盐和乳酸-乙醇酸聚合物或其盐可以分别溶解,再彼此 混合,或者可以都溶解在按一定比例的有机溶剂混合物中。
在这些溶剂 中,优选地采用卤代烃与醇的混合物,其中二氯甲烷与乙醇的混合物是 特别优选的。
当使用乙醇作为与二氯甲烷混合的有机溶剂时,二氯甲烷与乙醇的 有机溶剂混合物中的乙醇含量通常为约0.01至约50%(v/v),更优选为 约0.05至约40%(v/v),尤其为约0.1至约30%(v/v)。
尽管有机溶剂溶液中的乳酸-乙醇酸聚合物浓度可以因乳酸-乙醇酸 聚合物的分子量和有机溶剂的类型而异,不过当使用二氯甲烷作为有机 溶剂时,该浓度通常为约0.5至约70重量%,更优选为约1至约60重 量%,尤其为约约2至约50重量%。
当使用二氯甲烷与乙醇的混合物作为有机溶剂时,有机溶剂中的羟 萘甲酸或其盐浓度通常为约0.01至约10重量%,更优选为约0.1至约5 重量%,尤其为约0.5至约3重量%。
向所得羟萘甲酸或其盐和乳酸-乙醇酸聚合物的溶液中加入药理活性 物质或其盐,溶解或分散。
然后,将所得含有由药理活性物质或其盐、 羟萘甲酸或其盐和乳酸-乙醇酸聚合物组成的组合物的有机溶剂溶液加入 到水相中,形成O(油相)/W(水相)乳剂,然后将油相中的溶剂蒸发或者 分散在水相中,由此制得微胶囊。
该水相的体积通常为油相体积的约1 至约10,000倍,更优选为约5至约5,000倍,尤其为约10至约2,000倍。
上述外部水相可以含有乳化剂。
这样的乳化剂通常可以是任意能够 形成稳定O/W乳剂的乳化剂。
通常采用的是阴离子型表面活性剂(油酸 钠、硬脂酸钠、月桂基硫酸钠等)、非离子型表面活性剂(聚氧乙烯脱水 山梨糖醇脂肪酸酯[Tween 80,Tween 60,可从“ATRASPOWDER”获得]、 聚氧乙烯蓖麻油衍生物[HCO-60,HCO-50,可从“NIKKO CHEMICALS” 获得])、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羧甲基纤维素、卵磷脂、明胶、 透明质酸等。
任意上面列举的那些都可以单独使用或者彼此结合使用。
浓度优选为约0.0001至约10重量%,更优选为约0.001至约5重量%。
向外部水相中可以加入渗透剂。
该渗压剂可以是任意在其水溶液中 产生渗透压的物质。
这样的渗压剂例如可以是多元醇、一元醇、单糖、二糖、低聚糖、 氨基酸及其衍生物。
上述多元醇例如可以是三元醇如甘油,五元醇如阿糖醇、木糖醇和 福寿糖醇,六元醇如甘露糖醇、山梨糖醇和卫矛醇己六醇。
在上面列举 的那些中,六元醇是优选的,其中甘露糖醇是尤其优选的。
上述一元醇例如可以是甲醇、乙醇和异丙醇,其中乙醇是优选的。
上述单糖例如可以是戊糖如阿糖、木糖、核糖和2-脱氧核糖,己糖 如葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖、山梨糖、鼠李糖和岩藻糖,其中己 糖是优选的。
上述低聚糖例如可以是三糖如麦芽三糖和棉子糖,和四糖如水苏 糖,其中三糖是优选的。
上述单糖、二糖和低聚糖的衍生物例如可以是葡糖胺、半乳糖胺、 葡糖醛酸和半乳糖醛酸。
上述氨基酸例如可以是任意L-氨基酸,例如甘氨酸、亮氨酸和精氨 酸。
L-精氨酸是优选的。
任何这些渗透剂都可以单独使用或者彼此结合使用。
所用浓度的这些渗压剂的任何一种所产生的外部水相渗透压是生理 盐水渗透压的约1/50至约5倍,优选为约1/25至约3倍。
用于除去有机溶剂的方法可以是任何本来已知的方法或其相应方 法。
例如,在大气压或增量减压下蒸发有机溶剂,并用螺旋桨搅拌器、 磁搅拌器或超声处理机进行搅拌,或者用旋转蒸发器进行蒸发,并调节 真空水平,或者用透析膜逐渐蒸发。
利用离心或过滤作用分离所得微胶囊,用蒸馏水洗涤若干次,以除 去沉积在微胶囊表面上的任意游离形式的生理活性物质或其盐、羟萘甲 酸或其盐、载体、乳化剂等,然后再次分散在蒸馏水中,冷冻干燥。
在制造过程中,为了防止粒子之间的聚集,可以加入抗聚集剂。
这 样的抗聚集剂例如可以是水溶性多糖,例如甘露糖醇、乳糖、葡萄糖和 淀粉(例如玉米淀粉),氨基酸,例如甘氨酸,蛋白质,例如纤维蛋白和 胶原。
其中,优选地采用甘露糖醇。
冷冻干燥后,如果必要的话,可以在减压下加热除去微胶囊中所含 有的水和有机溶剂,同时避免微胶囊之间的融合。
优选地,在略高于乳 酸-乙醇酸聚合物的中间体玻璃转化点的温度下进行加热(玻璃转化点是 通过示差扫描量热法测定的),每分钟升温10至20℃。
乳酸-乙醇酸聚合 物的中间体玻璃转化点至高于该温度约30℃的温度是更优选的进行加热 的温度范围。
优选地,加热的温度在从乳酸-乙醇酸聚合物的中间体玻璃 转化点至高于中间体玻璃转化点10℃的温度的范围内,更优选地在从乳 酸-乙醇酸聚合物的中间体玻璃转化点至高于中间体玻璃转化点5℃的温 度的范围内。
尽管加热的时间阶段可以因微胶囊的量等而异,不过在微胶囊本身 的温度达到某一温度后,通常为约12小时至约168小时,优选为约24 小时至约120小时,尤其为约48小时至约96小时。
加热方法没有特别的限制,只要能够均匀加热微胶囊本体即可。
这样的加热方法例如可以是在恒温箱、流化罐、活动罐或干燥炉内 加热干燥的方法或者用微波加热干燥的方法。
在这些方法中,在恒温箱 内加热干燥的方法是优选的。
(ii)W/O/W法(1) 首先,制备乳酸-乙醇酸聚合物或其盐在有机溶剂中的溶液。
该有机 溶剂和乳酸-乙醇酸聚合物或其盐在有机溶剂中的浓度类似于上述(I)(i) 所述。
当采用有机溶剂混合物时,比例也类似于上述(I)(i)所述。
向所得乳酸-乙醇酸聚合物或其盐在有机溶剂中的溶液中加入生理活 性物质或其盐,溶解或分散。
然后,将所得含有由生理活性物质或其盐 和乳酸-乙醇酸聚合物或其盐组成的组合物的有机溶剂溶液(油相)与羟萘 甲酸或其盐的溶液(溶剂例如水,水性溶剂、例如醇(例如甲醇、乙醇), 吡啶水溶液,二甲基乙酰胺水溶液)混合。
将混合物用已知方法乳化,例 如使用均化器或者超声处理,形成W/O乳剂。
然后,将所得由生理活性物质或其盐、羟萘甲酸或其盐和乳酸-乙醇 酸聚合物或其盐组成的W/O乳剂加入到水相中,形成W(内部水相)/O(油 相)/W(外部水相)乳剂,然后蒸发油相中的溶剂,制得微胶囊。
该外部水 相的体积通常为油相体积的约1至约10,000倍,更优选为约5至约5,000 倍,尤其为约10至约2,000倍。
可以加入到上述外部水相中的乳化剂和渗透剂以及随后的制备都类 似于上述(I)(i)所述。
(iii)W/O/W法(2) 首先,制备羟萘甲酸或其盐和乳酸-乙醇酸聚合物或其盐在有机溶剂 中的溶液,所得有机溶剂溶液称为油相。
该制备方法类似于上述(I)(i)所 述。
或者,羟萘甲酸或其盐和乳酸-乙醇酸聚合物或其盐可以分别配制成 有机溶剂溶液,然后将二者混合。
尽管有机溶剂溶液中的乳酸-乙醇酸聚 合物浓度可以因乳酸-乙醇酸聚合物的分子量和有机溶剂的类型而异,不 过当使用二氯甲烷作为有机溶剂时,该浓度通常为约0.5至约70重量%, 更优选为约1至约60重量%,尤其为约2至约50重量%。
然后,制备生理活性物质或其盐的溶液或分散系(溶剂例如水和水与 醇(例如甲醇、乙醇)的混合物)。
生理活性物质或其盐的加入浓度通常为约0.001mg/ml至10g/ml, 更优选为0.1mg/ml至5g/ml,特别是10mg/ml至3g/ml。
可以加入已知的增溶剂和稳定剂。
关于溶解或分散生理活性物质和 添加剂,可以进行加热、摇动或搅拌,只要活性不丧失即可,所得水溶 液称为内部水相。
将上述所得内部水相和油相通过已知方法乳化,例如使用均化器或 者超声处理,形成W/O乳剂。
所要混合的油相的体积通常为内部水相体积的约1至约1,000倍, 更优选为约2至100倍,尤其为约3至约10倍。
所得W/O乳剂在约12至20℃下通常为约10至10,000cps,优选为 约100至5,000cps。
然后,将所得由生理活性物质或其盐、羟萘甲酸或其盐和乳酸-乙醇 酸聚合物或其盐组成的W/O乳剂加入到水相中,形成W(内部水相)/O(油 相)/W(外部水相)乳剂,然后将油相中的溶剂蒸发或者扩散到外部水相 中,由此制得微胶囊。
该外部水相的体积通常为油相体积的约1至约 10,000倍,更优选为约5至约50,000倍,尤其为约10至约2,000倍。
可以加入到上述外部水相中的乳化剂和渗透剂以及随后的制备都类 似于上述(I)(i)所述。
(II)相分离方法 当通过这种方法制备微胶囊时,在搅拌下向上述(I)水中干燥方法所 述由药理活性物质或其盐、羟萘甲酸或其盐和乳酸-乙醇酸聚合物或其盐 组成的组合物在有机溶剂中的溶液中分批加入凝聚剂,使微胶囊沉淀和 固化。
这样的凝聚剂为油相体积的约0.01至1,000倍,优选为约0.05至 约500倍,特别是约0.1至约200倍。
凝聚剂没有特别的限制,只要它是可与有机溶剂混合的聚合的、无 机的或植物的化合物,并且不发生所要溶解的生理活性物质或其盐与羟 萘甲酸或其盐和乳酸-乙醇酸聚合物或其盐的配位化合即可。
通常例如硅 油、芝麻油、大豆油、玉米油、棉子油、椰子油、亚麻子油、矿物油类、 正己烷、正庚烷等。
任何这些物质都可以单独使用或者彼此结合使用。
分离所得微胶囊,例如用庚烷反复洗涤,使由药理活性物质或其盐、 羟萘甲酸或其盐和乳酸-乙醇酸聚合物或其盐组成的组合物不含凝聚剂和 其他物质,然后在减压下干燥。
或者,通过类似于上述(I)(i)所述包水干 燥方法的方法进行洗涤,然后冷冻干燥,然后进行加热干燥。
(III)喷雾干燥方法 当通过这种方法制备微胶囊时,将上述(I)包水干燥方法所述在有机 溶剂中包含药理活性物质或其盐、羟萘甲酸或其盐和乳酸-乙醇酸聚合物 或其盐的溶液经由喷嘴喷入喷雾干燥器的干燥腔内,由此在极短的阶段 内蒸发有机溶剂的微粒液滴,制得微胶囊。
这样的喷嘴例如可以是双流 喷嘴、压力喷嘴、转盘喷嘴等。
随后,如果必要的话通过类似于上述(I) 包水干燥方法所述的方法进行洗涤,然后冷冻干燥,然后进行加热干燥。
除上述微胶囊以外的微胶囊剂型可以这样制备,使上述微胶囊制备 方法(I)的包水干燥方法所述在有机溶剂中包含药理活性物质或其盐、羟 萘甲酸或其盐和乳酸-乙醇酸聚合物或其盐的溶液例如受到旋转蒸发器的 处理,其中控制真空水平使有机溶剂和水蒸发至干,然后利用气流粉碎 机等进行粉碎,由此得到微细粉末(也称微粒体)。
其后,粉碎后的微细粉末可以通过类似于上述微胶囊制备方法(I)中的 包水干燥方法所述的方法进行洗涤,然后冷冻干燥,然后进行加热干燥。
这里所得微胶囊或微细粉末能够使药物释放相当于所用乳酸-乙醇酸 聚合物的降解速率。
根据本发明的缓释组合物可以是任意剂型,例如微球体、微胶囊、 微细粉末(微粒体)等,它优选地是微胶囊的形式。
根据本发明的缓释组合物可以照此配制,或者作为原料,用于制备 任何各种剂型,例如肌内、皮下或组织注射或植入制剂,鼻、直肠和子 宫内黏膜制剂,口服制剂(例如固体剂型,例如胶囊剂,包括硬与软胶囊 剂,颗粒剂和粉剂,液体制剂,例如糖浆剂、乳剂和悬液)等。
当根据本发明的缓释组合物配制成注射制剂时,它与下列成分一起 配制成水悬液:分散剂(例如表面活性剂如Tween 80和HCO-60,多糖如 透明质酸钠,羧甲基纤维素,精氨酸钠等)、防腐剂(例如对羟基苯甲酸 甲酯、对羟基苯甲酸丙酯)、等渗剂(例如氯化钠、甘露糖醇、山梨糖醇、 葡萄糖、脯氨酸),或者与植物油一起分散,例如芝麻油和玉米油,制得 油悬液,由此得到可实用的缓释注射制剂。
当用作注射制剂悬液时,可接受的缓释组合物粒径应保证有令人满 意的分散性能和通过注射器针头,平均粒径例如可以是约0.1至约 300μm,优选为约0.5至约150μm,更优选为约1至约100μm。
本发明的缓释组合物的无菌制剂例如可以通过这样的方法获得:整 个制造过程都是在无菌条件下进行的方法、利用γ射线灭菌的方法或加入 防腐剂的方法均可,没有特别的限制。
由于根据本发明的缓释组合物具有低毒性,它能够作为安全的哺乳 动物(例如人、牛、猪、狗、猫、小鼠、大鼠、兔)药物使用。
本发明的缓释组合物的剂量可以因作为主要成分的生理活性物质的 类型和含量、剂型、药理活性物质释放的持续时间、所治疾病和所治动 物而异,它可以是药理活性物质的有效量。
当缓释制剂是6个月制剂时, 作为主要成分的药理活性物质的单次剂量优选为约0.01mg至约10mg/kg 体重每天每名成人,更优选为约0.05mg至约5mg/kg体重。
缓释组合物的单次剂量优选为约0.05mg至约50mg/kg体重每名成 人,更优选为约0.1mg至约30mg/kg体重。
给药频率可以是数周一次、一月一次或数月一次(例如3、4或6个 月),这取决于作为主要成分的生理活性物质的类型和含量、剂型、药理 活性物质释放的持续时间。
尽管根据本发明的缓释组合物可以作为预防和治疗剂,用于对抗各种 疾病,这取决于其中所含有的药理活性物质的类型,当含有LH-RH衍生物 作为药理活性物质时,它可以作为预防和治疗剂,用于对抗激素依赖性疾 病,尤其是性激素依赖性癌症(例如前列腺癌、子宫癌、乳腺癌、垂体癌等)、 性激素依赖性疾病(例如前列腺增生、子宫内膜异位、子宫肌瘤、青春期早 熟、痛经、经闭、经前期综合征、多腔性卵巢综合征等),并且可用作避孕 剂(或者在节育后利用反弹作用抗不育症)。
它还可用于治疗良性或恶性肿 瘤,该肿瘤不是性激素依赖性的,而是LH-RH敏感性的。
                         实施例 根据下列实施例和实验对本发明作进一步描述,并不打算限制本发明。
实施例1 将1.2g 5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLue-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5(以下 简称肽A,Takeda Chemical Industries,Ltd.)的乙酸盐溶于1.2ml蒸馏水 的溶液与4.62g DL-乳酸聚合物(重均分子量:40,600,数均分子量: 21,800,末端羧基水平:52.7μmol/g)和0.18g 1-羟基-2-萘甲酸溶于8.25ml 二氯甲烷与0.45ml乙醇的溶剂混合物的溶液混合,用均化器乳化,形成 W/O乳剂。
然后,将W/O乳剂倒入预先保持在15℃下的1200ml 0.1%(w/w) 聚乙烯醇(EG-40,Nippon Synthetic Chemical Industry Co.,Ltd.)的水溶液, 用涡轮混合机在7,000rpm下搅拌,形成W/O/W乳剂。
将该W/O/W乳 剂在室温下搅拌3小时,使二氯甲烷和乙醇蒸发或者扩散到外部水层中, 然后使油相固化,通过75μm孔径的筛,在2000rpm下离心5分钟(05PR-22, Hitachi,Ltd.),沉淀出微胶囊,然后回收。
将微胶囊再次分散在蒸馏水 中,再次离心,洗涤除去游离组分,然后回收。
向所回收的微胶囊中加 少量蒸馏水混合,再次分散。
将0.3g甘露糖醇溶于其中,然后将混合物 冷冻干燥,得到粉末。
微胶囊质量的%回收率为46.91%,微胶囊的肽A 含量为18.7%,1-羟基-2-萘甲酸含量为2.57%。
实施例2 将1.2g肽A的乙酸盐溶于1.2ml蒸馏水的溶液与4.62g DL-乳酸聚 合物(重均分子量:40,600,数均分子量:21,800,末端羧基水平:52.7μmol/g) 和0.18g 3-羟基-2-萘甲酸溶于7.5ml二氯甲烷与0.45ml乙醇的溶剂混合 物的溶液混合,用均化器乳化,形成W/O乳剂。
其后,将混合物进行类 似于实施例1的处理,得到微胶囊粉末。
微胶囊质量的%回收率为 53.18%,微胶囊的肽A含量为17.58%,3-羟基-2-萘甲酸含量为2.49%。
实验1 将各约45mg的实施例1和2所得微胶囊分散在0.3ml分散介质 (0.15mg羧甲基纤维素、0.3mg聚山梨醇酯80、15mg甘露糖醇的蒸馏水 溶液)中,经由22G注射针头对7周龄雄性SD大鼠背部皮下给药。
经过 预定阶段后,处死大鼠,提取剩余在给药部位的微胶囊,检查肽A含量, 除以最初的含量,得到%残留率,如表1所示。
                   表1:肽A的%残留率                 实施例1               实施例2 1天                 92.9%                93.7% 2周                 74.6%                78.8% 4周                 56.0%                58.0% 8周                 31.6%                36.0% 12周                28.3%                32.3% 16周                24.5%                26.8% 20周                17.8%                23.8% 26周                12.6%                15.6% 从表1明显看出,含有1-羟基-2-萘甲酸的实施例1微胶囊和含有3- 羟基-2-萘甲酸的实施例2微胶囊都能够含有高浓度的药学活性物质,并 且对生理活性物质的初期过度释放表现出极高的抑制作用。
这些微胶囊 都实现了生理活性物质在极长阶段内以恒定速率缓释。
实施例3 将1.2g肽A的乙酸盐溶于1.2ml蒸馏水的溶液与4.62g DL-乳酸聚 合物(重均分子量:32,000,数均分子量:17,800,末端羧基水平:72.1μmol/g) 和0.18g 3-羟基-2-萘甲酸溶于7.5ml二氯甲烷与0.45ml乙醇的溶剂混合 物的溶液混合,并用均化器乳化,形成W/O乳剂。
其后,将混合物进行 类似于实施例1的处理,得到微胶囊粉末。
微胶囊质量的%回收率为 51.2%,微胶囊的肽A含量为18.05%,3-羟基-2-萘甲酸含量为2.42%。
实验3 将约250mg的实施例3所得微胶囊分散在1.5ml分散介质(0.75mg 羧甲基纤维素、1.5mg聚山梨醇酯80、75mg甘露糖醇的蒸馏水溶液)中, 经由22G注射针头对beagle狗臀部肌内给药。
另一方面,将约125mg 的这种微胶囊分散在0.75ml分散介质(0.375mg羧甲基纤维素、0.75mg 聚山梨醇酯80、37.5mg甘露糖醇的蒸馏水溶液)中,经由22G注射针头 对beagle狗臀部皮下给药。
经过预定阶段后,从前臂静脉采血,检查肽 A和睾酮的血清水平,如表2所示。
                    表2:肌内给药                 肽A(ng/ml)       睾酮(ng/ml)  1天                7.33             5.31  2周                0.76             0.46  4周                0.91             0.58  8周                3.65             0.25或以下 12周                1.56             0.25或以下 16周                1.14             0.25或以下 20周                0.59             0.25或以下 26周                0.53             0.25或以下 28周                0.48             0.25或以下 30周                0.33             0.26 32周                0.37             0.79 34周                0.22             1.41 36周                0.14             0.94 皮下给药               肽A(ng/ml)       睾酮(ng/ml) 1天                 17.61            2.79 2周                 0.99             1.95 4周                 0.62             1.50 8周                 0.76             0.68 12周                1.77             0.25或以下 16周                1.57             0.25或以下 20周                1.23             0.25或以下 26周                1.93             0.33 28周                0.35             1.59 30周                0.25             2.00 从表2明显看出,生理活性物质的血液水平保持长达约26周的阶 段,其间作为功效指数的睾酮水平保持在正常水平或更低,然后响应于 生理活性物质血液水平降低,在约28周至34周内开始恢复至正常水平。
即使制剂中含有羟萘甲酸,生理活性物质也长期稳定地存在于微胶囊 中,而不丧失其活性,由此被持续释放。
显然,稳定的功效与给药方式 无关。
实施例4 将86.2g DL-乳酸聚合物(重均分子量:28,300,数均分子量:14,700, 基于标记法的羧基水平:69.2μmol/g)溶于67g二氯甲烷的溶液与在210g 二氯甲烷和16.2g乙醇中溶解9g 3-羟基-2-萘甲酸所得87.7g溶液混合, 调节在28.8℃。
将219.2g该有机溶剂溶液称重,与保持在54.8℃下的、 20.4g肽A的乙酸盐溶于18.8g蒸馏水的溶液混合,将混合物搅拌5分 钟,仅粗略乳化,然后用均化器在10,000rpm下乳化5分钟,形成W/O 乳剂。
然后将该W/O乳剂冷却至12.7℃,历经5分又11秒倒入预先保 持在12.7℃下的20L 0.1%(w/w)聚乙烯醇(EG-40,NIPPON SYNTHETIC CHEMICAL INDUSTRY CO.,LTD.)的水溶液,用HOMOMIC LINE FLOW (TOKUSHUKIKAI)在9,000rpm下搅拌,形成W/O/W乳剂。
将该W/O/W 乳剂调节在15℃下达30分钟,然后搅拌2小时又30分钟,且不调节温 度,使二氯甲烷和乙醇蒸发或者扩散到外部水层中,然后使油相固化, 通过75μm孔径的筛,在2000rpm下连续离心(H-600S, KOKUSANENSHINKI),沉淀出微胶囊,然后回收。
将所回收的微胶囊 再次分散在少量蒸馏水中,通过90μm孔径的筛。
将12.3g甘露糖醇溶 于其中,然后将混合物冷冻干燥,得到粉末。
微胶囊质量的收率为84.4g, 相当于%回收率为75.7%,肽A含量为17.8%,3-羟基-2-萘甲酸含量为 2.5%。
实施例5 将107.8g DL-乳酸聚合物(重均分子量:27,700,数均分子量:15,700, 基于标记法的羧基水平:69.8μmol/g)溶于83.9g二氯甲烷的溶液与在 175.8g二氯甲烷和13.5g乙醇中溶解7.5g 1-羟基-2-萘甲酸所得110.2g溶 液混合,调节在28.2℃。
将274.2g该有机溶剂溶液称重,与保持在52.4 ℃下的、25.6g肽A的乙酸盐溶于23.52g蒸馏水的溶液混合,将混合物 搅拌5分钟,仅粗略乳化,然后用均化器在10,080rpm下乳化5分钟, 形成W/O乳剂。
然后将该W/O乳剂冷却至12.5℃,历经3分又42秒倒 入预先保持在13.1℃下的25L 0.1%(w/w)聚乙烯醇(EG-40,NIPPON SYNTHETIC CHEMICAL INDUSTRY CO.,LTD.)的水溶液,用 HOMOMIC LINE FLOW(TOKUSHUKIKAI)在7,000rpm下搅拌,形成 W/O/W乳剂。
将该W/O/W乳剂调节在15℃下达30分钟,然后搅拌2 小时又30分钟而不调节温度,使二氯甲烷和乙醇蒸发或者扩散到外部 水层中,然后使油相固化,通过75μm孔径的筛,在2000rpm下连续离 心(H-600S,KOKUSANENSHINKI),沉淀出微胶囊,然后回收。
将所回 收的微胶囊再次分散在少量蒸馏水中,通过90μm孔径的筛。
将15.4g 甘露糖醇溶于其中,然后将混合物冷冻干燥,得到粉末。
微胶囊质量的 收率为105.7g,相当于%回收率为75.8%,肽A含量为17.8%,1-羟基-2- 萘甲酸含量为2.8%。
实施例6 将107.6g DL-乳酸聚合物(重均分子量:30,800,数均分子量:13,900, 基于标记法的羧基水平:66.3μmol/g)溶于83.3g二氯甲烷的溶液与在175g 二氯甲烷和13.5g乙醇中溶解7.5g 1-羟基-2-萘甲酸所得109.7g溶液混 合,调节在28.7℃。
将274.3g该有机溶剂溶液称重,与保持在51.2℃下 的24.89g肽A的乙酸盐溶于23.49g蒸馏水的溶液混合,将混合物搅拌 5分钟,仅粗略乳化,然后用均化器在10,070rpm下乳化5分钟,形成 W/O乳剂。
然后将该W/O乳剂冷却至12.8℃,历经4分又13秒倒入预 先保持在13.3℃下的25L 0.1%(w/w)聚乙烯醇(EG-40,NIPPON SYNTHETIC CHEMICAL INDUSTRY CO.,LTD.)的水溶液,用 HOMOMIC LINE FLOW(TOKUSHUKIKAI)在7,000rpm下搅拌,形成 W/O/W乳剂。
将该W/O/W乳剂调节在15℃下达30分钟,然后不调节 温度搅拌2小时又30分钟,使二氯甲烷和乙醇蒸发或者扩散到外部水 层中,然后使油相固化,通过75μm孔径的筛,在2000rpm下连续离心 (H-600S,KOKUSANENSHINKI),沉淀出微胶囊,然后回收。
将所回收 的微胶囊再次分散在少量蒸馏水中,通过90μm孔径的筛,与15.4g甘 露糖醇混合,溶解,然后将混合物冷冻干燥,得到粉末。
微胶囊质量的 收率为101.9g,相当于%回收率为73.1%,肽A含量为17.3%,1-羟基-2- 萘甲酸含量为2.9%。
实验3 将各约45mg的实施例5和6所得微胶囊分散在0.3ml分散介质 (0.15mg羧甲基纤维素、0.3mg聚山梨醇酯80、15mg甘露糖醇的蒸馏水 溶液)中,经由22G注射针头对7周龄雄性SD大鼠背部皮下给药。
经过 预定阶段后,处死大鼠,提取剩余在给药部位的微胶囊,检查肽A含量, 除以最初的含量,得到%残留率,如表3所示。
                 表3:肽A的%残留率                实施例5               实施例6 1天                87.0%                90.5% 1周                80.0%                83.2% 2周                72.3%                73.5% 4周                57.6%                58.0% 8周                48.2%                46.7% 12周               34.5%                32.8% 16周               23.1%                22.0% 20周               14.7%                13.4% 26周               6.1%                 3.3% 从表3明显看出,含有1-羟基-2-萘甲酸的实施例5和6微胶囊的区 别在于作为基质的乳酸聚合物的分子量,它们即使各自按约125g规模 制备,也都能够含有高浓度的药学活性物质,并且对生理活性物质的初 期过度释放表现出极高的抑制作用。
这些微胶囊都实现了生理活性物质 在极长阶段内以恒定速率缓释。
                      工业实用性 本发明的缓释组合物含有高浓度的药理活性物质,抑制该物质的初 期过度释放,长期(优选为约6个月或更长)保持稳定的释放速率。
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