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作为玻连蛋白抑制剂的1,4,5,6-四氢嘧啶衍生物

基本信息

  • 申请号 CN00810416.6 
  • 公开号 CN1361767A 
  • 申请日 2000/07/08 
  • 公开日 2002/07/31 
  • 申请人 艾文蒂斯药品德国股份有限公司  
  • 优先权日期  
  • 发明人 G·布雷珀尔 A·佩曼 T·沃曼恩  
  • 主分类号  
  • 申请人地址 德国美因河畔法兰克福 
  • 分类号  
  • 专利代理机构 中国专利代理(香港)有限公司 
  • 当前专利状态 发明专利申请公布 
  • 代理人 关立新 
  • 有效性 发明公开 
  • 法律状态
  •  

摘要

本发明涉及式I的(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯半富马酸盐及其制备方法,该方法包括使4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酸或其衍生物与(2S)-3-氨基-2-(萘-1-磺酰氨基)丙酸乙酯反应。
式I化合物是一种有价值的药物,可用于例如治疗或预防会因抑制玻连蛋白受体而受影响的疾病,特别是骨病,例如骨质疏松。
本发明还涉及可用于制备式(I)化合物的化学中间体。
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权利要求书


1.式I的(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧 啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯半富马酸盐。

2.含有权利要求1的式I化合物和一种可药用载体的药物组合 物。

3.制备式IV的(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1,4,5,6- 四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯或其盐的方 法,包括使式II的4-(2-(1,4,5,6-四羟基嘧啶-2-基氨甲酰)乙基) 苯甲酸或其式II中X为羟基或离去基团的衍生物与式III的(2S)-3- 氨基-2-(萘-1-磺酰氨基)丙酸乙酯反应,或盐或这些化合物中任何一 个或两个的盐反应。

4.权利要求3的方法,其特征在于X是Cl。

5.权利要求3和/或4的方法,其特征在于,在式II和式III 化合物反应后,使用一种酸并得到式IV化合物与该酸的酸加成盐。

6.权利要求3至5中一项或多项的方法,其特征在于,制备了 (2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基 甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯半富马酸盐。

7.式XV化合物或其盐, 其中Y是羟基、氯或溴。

8.权利要求7的式XV化合物,该化合物是4-(2-(1,4,5,6-四 氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酸或4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2- 基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氯,或是这些化合物任一种的盐。

9.式XIII的4-(2-(嘧啶-2-基氨基甲酰)乙烯基)苯甲酸苄酯或 其盐。

10.一种制备4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯 甲酸或其盐的方法,包括将4-(2-(嘧啶-2-基氨基甲酰)乙烯基)苯甲 酸苄酯或其盐氢化。
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说明书

本发明涉及式(I)的(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2- (1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯半富 马酸盐及其制备方法。
该方法包括4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲 酸或其衍生物与(2S)-3-氨基-2-(萘-1-磺酰氨基)丙酸乙酯反应。
式I 化合物是一种有价值的药物,它可以用于例如治疗或预防会因抑制玻 连蛋白受体而受影响的疾病,特别是骨病,例如骨质疏松。
本发明还 涉及用于制备式I化合物的化学中间体。
骨骼经受着不断进行的动态更新过程,这包括骨吸收和骨形成。
在某些骨病如骨质疏松中,骨吸收比骨形成占优势,从而导致骨质量 降低和脆性提高。
骨吸收和骨形成是受专供此用的各类细胞控制的。
骨吸收是基于破骨细胞导致的骨基质的破坏。
活化的破骨细胞附着在 骨基质的表面上并分泌出蛋白酶和酸,它们造成骨骼破坏。
破骨细胞 对骨骼的附着,以及因此造成的骨吸收,是受破骨细胞的细胞表面上 玻连蛋白受体αvβ3的控制。
αvβ3在这种情形与骨基质蛋白例如骨桥蛋 白、骨涎蛋白和血小板反应蛋白相结合。
αvβ3的拮抗剂抑制了破骨细 胞对骨的附着,从而抑制骨吸收,这已在例如以下文献所述的体内实 验中得到证明:Fischer等,内分泌学(Endocrinology), 132(1993)1411;Yamamoto等,内分泌学(Endocrinology), 139(1998)1411;或Miller等,生物有机和医药化学快报 (Bioorg.Med.Chem.Letters)9(1999)1807。
玻连蛋白受体αvβ3是属于整连蛋白受体超家族的一种膜糖蛋白, 除了在破骨细胞上以外,还表达在其它细胞如内皮细胞、血管平滑肌 系统的细胞或肿瘤细胞的细胞表面上,控制这些细胞参与的相互作用 过程。
因此,除了抑制骨吸收以外,αvβ3拮抗剂还能够影响其它过程, 例如肿瘤生长和转移、动脉硬化、血管形成或发炎,一般来说,αvβ3拮抗剂适合治疗和预防基于细胞-细胞或细胞-基质相互作用过程中 玻连蛋白受体与其配体之间相互作用的那些疾病,或者可以通过影响 该相互作用而被防止、减轻或治愈的疾病。
在以下文献中评述了作为 治疗目标的αvβ3和αvβ3拮抗剂的适应症:Hillis等,临床科学 (Clinical Science)91(1996)639;Engleman等,医药化学年报 (Ann.Rep.Med.Chem.)31(1996)191;或Samanen等,当代药物设计 (Current pharm Design)3(1997)545。
例如,Yue等在药理研究通讯(Pharmacol.Rev.Commun.) 10(1998)9;或Coleman等在循环研究(Circulation Res.)84 (1999)1268中表明,αvβ3拮抗剂抑制血管平滑肌细胞的迁移,并减少 会导致动脉硬化和血管成形术后再狭窄的新内膜的形成。
还已证明,玻连蛋白受体αvβ3与多种癌症的发展有关,而且αvβ3拮抗剂能在血管形成期间通过诱发血管细胞的编程性细胞死亡使肿 瘤收缩,并能抑制肿瘤生长和肿瘤转移(例如见,Brooks等,细胞 (cell),79(1994)1157;Carron等,癌症研究(Cancer Res.)58(1998)1930;Yun等,癌症研究(Cancer Res.)56 (1996)1268;或上述的参考文献).αvβ3拮抗剂与其它的已知抗肿瘤 治疗剂的结合已显示出对肿瘤和转移极其有效(见Lode等,美国国家 科学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)96(1999)1591)。
Friedlander等在科学(Since)270(1995)1550中描述了抑制 bFGF-诱发的鼠眼中血管形成过程的αvβ3拮抗剂,这种性质可用于治 疗视网膜病和牛皮癣。
Storgard等在临床研究杂志 (J.Clin.Invest.)103(1999)47中描述了αvβ3拮抗剂在治疗关节炎病 中的应用。
因此,对于玻连蛋白受体αvβ3或与其有关的相互作用施加影响, 提供了对于仍然需要合适的药物活性组分进行治疗和预防的各种疾 病施加影响的可能性。
各种整连蛋白拮抗剂,包括αvβ3拮抗剂,已有介绍。
作为例子, 可以提到在EP-A-820991、欧洲专利申请99102916.6、WO-A- 93/19046、WO-A-94/12181、WO-A-95/32710、WO-A-98/00395、WO- A-98/23451或WO-A-99/32457中所述的化合物。
在国际专利申请 PCT/EP 99/00242及其对应申请中,介绍了一些磺酰胺衍生物,它们 是特别强的αvβ3拮抗剂和骨吸收抑制剂。
这些磺酰胺衍生物包括 (2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基 甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸及其酯。
(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3- (4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙 酯在体内水解成实际上拮抗αvβ3的(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4- (2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸,显示 出特别有利的药理型式。
利用国际专利申请PCT/EP 99/00242中所述的制备方法,(2S)- 2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰) 乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯以盐酸盐形式得到。
但是,在国际专利申 请PCT/EP 99/00242中通过浓缩游离的酯的盐酸溶液并随后冷冻干燥 分离出的盐酸盐不能用结晶法或者至少沉淀法分离或纯化。
因此, (2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基 甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯的盐酸盐几乎不能在药物中作为药 理活性物质,因为法规严格限定了药物成分的纯度,而且作为在制 备、分离和纯化药物过程中的工业合成目标产物,同样必须遵守法规 严格限定的条件和操作程序。
(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2- (1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯与各 种其它酸的盐也不能结晶或至少是沉淀,因此同样不能以实际可行 的、成本和劳动力有效的方式以工业规模制备。
本发明的目的是提供 合适形式的(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶 -2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯,它容易分离和纯化,而 且有可能容易达到所要求的纯度并符合与工业合成有关的要求和盖 仑制剂的要求。
这一目的出乎意料地通过提供(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4- (2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯 的半富马酸盐得到实现,该盐中含有摩尔比为2∶1(或近似2∶1)的 (2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基 甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯和富马酸,即,它含有每摩尔 (2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基 甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯1/2(=0.5)(或近似1/2)摩尔的富 马酸。
因此,本发明的一个对象是式I的(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)- 3-(4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸 乙酯半富马酸盐。
式I的特定的盐具有有利的物理化学性质例如没有想到的不吸湿 性和稳定性。
它容易用沉淀法分离,例如从合成过程中得到的反应溶 液中沉淀,而且如果希望纯化,则可以在规定的条件下沉淀,例如从 乙醇溶液中沉淀。
该化合物因此满足对药物的立法和技术要求。
式I化合物可以按照制备酸加成盐的常规步骤制备,游离的 (2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基 甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯可以象国际专利申请PCT/EP 99/00242中所述作为原位生成的中间体得到,将其按每摩尔约0.5 摩尔或适当过量(例如0.55或0.60摩尔)的富马酸在溶剂或稀释剂中 混合,或者可以由作为合成中间体得到的(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)- 3-(4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸 乙酯的另一种盐通过阴离子交换制备。
式I化合物的制备方法优选包 括一种制备(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶 -2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯的新的合成策略,随后将 其转化成式I的半富马酸盐。
这种新方法通过简单的汇集步骤以高产 率得到所要的化合物,它将在下面介绍,是本发明的另一对象。
这种新方法可以制备式IV的(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4- (2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯 及其盐,特别是式I的半富马酸盐,其特征在于式II的4-(2- (1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酸或其衍生物与式III 的(2S)-3-氨基-2-(萘-1-磺酰氨基)丙酸乙酯,或这些化合物中任何 一个或两个的盐之间进行反应的缩合步骤。
这样得到的式IV化合物 随后可以用酸,例如用制备式I化合物所用的富马酸,转化成酸加成 盐。
式II化合物中的基团COX可以是羧基COOH或是羧酸的活性衍生 物,例如羧酸酰卤化物,如羧酸酰氯或羧酸酰溴;活性羧酸酯,如合 适的芳基酯,例如苯酯、对硝基苯酯或五氟苯基酯;羧酸唑化物,如 咪唑化物;或是在溶液中通常只作为中间体存在的基团,如混合酸 酐,例如由羧酸和氯甲酸异丁酯得到的混合碳酸酸酐,或活性酯,如 1-羟基苯并三唑基酯或N-羟基丁二酰亚胺基酯。
式I中的X因此可以 是羟基或一个离去基团,例如,羟基、氯、溴、未取代的或取代的苯 基、异丁氧羰基氧基等。
优选X是羟基或氯,更优选是氯。
可用于该反应的式II和式III化合物的盐可以是例如氢卤酸盐 (如盐酸盐或氢溴酸盐),与其它无机酸如硫酸形成的盐,或与有机羧 酸或磺酸(如三氟乙酸或对甲苯磺酸)形成的盐。
使用式II化合物和/ 或式III化合物的盐形式可能有利,因为在其先期制备中是以盐的形 式得到式II和/或式III化合物,避免了额外的步骤,而且/或者盐 在工业过程中更容易处理,以及/或者盐比各自的游离化合物更稳 定。
例如,如果在式III化合物的先期制备中乙酯基团是由各自的羧 酸通过在酸(如盐酸或硫酸)存在下与乙醇酯化得到的,则式III化合 物是以在胺部分与该酸的酸加盐形式得到,另外,作为这样一种盐, 式III化合物在贮存期间比游离胺更稳定。
类似地,其中X是氯的式 II化合物可以在其先期制备中以胍部分的盐酸盐形式得到,作为这样 一种盐,可能更稳定和更易处理。
优选在与式II化合物的反应中使 用盐形式,特别是盐酸盐形式的式III化合物。
在X是氯或溴的情形, 式II化合物也优选以各自的氢卤酸盐的形式,例如以盐酸盐形式使 用。
在X是羟基的情形,式II化合物可以以含有带负电的羧基和带 正电的胍基的内盐(或甜菜碱或两性离子)形式存在,该类型的盐也属 于本发明的范围。
由式II和式III化合物得到式IV化合物的反应是在本领域技术 人员熟知的由胺和羧酸或其衍生物形成酰胺的常用条件下进行的,这 包括肽化学已知的方法和条件。
这类反应的细节可以在标准参考书中 查到,例如Houben-Weyl,有机化学方法(Methoden der Organischen Chemie),Georg Thieme Verlag,Stuttgart,1974;或J.March, 高等有机化学(Advanced Organic Chemistry),第三版,John Wiley & Sons,1985。
当在反应中使用其中COX是COOH的式II化合物时,常将其用羧 酸的常用活化剂原位活化,例如用碳化二亚胺,如N,N’-二环己基碳 化二亚胺或N,N’-二异丙基碳化二亚胺,脲鎓盐,如四氟硼酸O-((氰 基(乙氧羰基)亚甲基)氨基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓盐(TOTU)或六氟 磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓(HATU);或丙 基膦酸酐。
活化也可以进行到形成作为原位中间体的一种上述的式II 化合物,例如通过与1,1’-羰基二咪唑反应形成的咪唑化物,或通过 与氯甲酸烷基酯反应形成的混合碳酸酐,或通过与氯化剂(如亚硫酰 二氯或草酰氯)反应形成的酰基卤化物,如酰氯。
活化反应可以在标 准条件下进行。
例如,用氯甲酸烷基酯、碳化二亚胺或脲鎓盐活化常 常在惰性非质子溶剂中,例如在烃类或卤化烃类(如甲苯或二氯甲 烷)、醚类(如四氢呋喃、二噁烷或二甲氧基乙烷)、酯类(如乙酸乙 酯)、酰胺(如N,N-二甲基甲酰胺或N-甲基吡咯烷酮)、腈类(如乙腈) 或这些溶剂的混合物中于约-10℃至约室温的温度下进行。
活化的羧 酸随后与式III化合物反应,通常反应温度为约-10℃至约室温。
活 化及随后的与式III化合物的反应通常在碱存在下进行,例如叔胺, 如三乙胺、N,N-二异丙基乙胺或N-甲基吗啉。
在使用式III化合物的 盐的情形,该碱还释放出式III的游离胺,并确保最终存在式IV的 游离化合物。
当其中COX是羧酸酯的式II化合物与式III化合物或 其盐反应时,也可以使用所述的碱和溶剂,例如所述的烃、醚、酰胺 或腈,这样的反应通常在约0℃至约80℃的温度进行。
当使用其中X是氯或溴(特别是氯)的式II化合物时,除了例如 烃或氯化烃(如甲苯、氯仿或二氯甲烷)、醚(如四氢呋喃、二噁烷或 二甲氧基乙烷)、酯(如乙酸乙酯)、酰胺(如N,N-二甲基甲酰胺或N- 甲基吡咯烷酮)、腈(如乙腈)或这些溶剂的混合物之外,反应也可以 在水或者一种或多种上述溶剂与水的混合物中进行,特别优选在水和 与水基本上不混溶的有机溶剂组成的两相体系中进行,例如在烃或氯 化烃(如二氯甲烷)与水的混合物或在酯(如乙酸乙酯)与水的混合物 中进行。
为了得到游离的式IV化合物,其中X是氯或溴的式II化合物通 常与式III化合物在足量的碱存在下反应,该碱清除掉反应中产生的 卤化氢,并且在使用式III化合物的盐的情形还释放出游离胺。
除了 叔胺如三乙胺或吡啶之外,也可以有利地使用无机碱,例如碳酸氢盐 (如碳酸氢钠或碳酸氢钾)、碳酸盐(如碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾、碳 酸铯、碳酸镁或碳酸钙)或氢氧化物(如氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化 钙),或这些碱的混合物。
特别是当反应是在水存在下进行时,优选 使用无机碱。
某些碱和向反应混合物中引入碱的某些方式特别有利, 这取决于其中X是氯或溴的式II化合物与式III化合物的反应的预 定的技术细节。
例如,在两相体系中使用碳酸氢盐的情形,在反应开 始时加入全部的碱可能较好,而在使用氢氧化物的情形,则最好是在 反应过程中逐渐加碱。
也可能优选以这样的方式加碱,即,在其中X 是氯或溴的式II化合物与式III化合物反应期间一直保持一定的pH 范围,例如pH为约5-10,特别是约7-9。
其中X是氯或溴的式II化合物与式III化合物的反应通常在约 0-40℃,优选在约10-30℃,特别是在约室温下进行。
通常,取决于反应的具体方式,式II和式III化合物的摩尔比 一般为约1.1∶1至约1∶1.1,优选为约1∶1。
式II化合物可以先加入, 特别是在使用要先进行活化的其中X为羟基的式II化合物时,随后 将式III化合物以一份或几份或以连续方式加入。
与此一样,可以先 加入式III化合物,式II化合物可以以一份或几份或连续加入,或 者也可以将两个组分同时计量加入反应器中。
式II和式III化合物 可以以溶液、悬浮液或固体形式使用。
取决于反应的具体情况,式II 和式III化合物的反应经常在反应组分混合后不久完成,反应混合物 通常需要连续搅拌不超过几小时,例如0.5-8小时。
反应混合物的后处理取决于反应进行的具体方式。
一般,用常规 的处理步骤进行后处理,例如,加水和/或有机溶剂,调节pH,分离 各相,进行萃取,洗涤,干燥,过滤,蒸发等。
如果式I化合物的反 应是在水不溶性有机溶剂内进行,则后处理优选包括加水形成两相体 系,任选地调节至略呈碱性的pH,分离各相,任选地萃取水相,将有 机相干燥和任选地浓缩或蒸发。
在反应于水-与水不混溶的溶剂的混 合物中进行的情形,优选以相应的方式进行后处理。
如果反应是在与 水混溶的有机溶剂中进行,后处理的进行优选是先在减压下除去溶 剂,然后加入与水不混溶的溶剂和水以形成两相体系并象上述一样进 行。
在所有这些优选的后处理步骤中,式IV的游离化合物都以在有 机溶剂中的溶液形式得到,如果在蒸发步骤中完全除掉了溶剂,则以 蒸发残留物形式得到,随后可将其溶在所要的有机溶剂中。
为了制备所要的式IV化合物的酸加成盐,将得到的式IV化合物 的溶液与所需之酸结合。
该酸可以以纯形式、溶液或悬浮液形式使 用,可以将酸加到式IV化合物的溶液中,也可以将式IV化合物的溶 液加到酸中。
优选的酸量取决于形成盐的具体情况。
如果要制备1∶1 酸加成盐,通常使用摩尔比为约1∶1或者由约1.3∶1至1∶1、或者约 1.1∶1至1∶1的过量的酸,其中酸的摩尔量可以方便地以起始物式II 或式III化合物的摩尔量为基础。
如果要制备含有每摩尔酸2摩尔式 I化合物的2∶1酸加成盐,则酸通常以约0.5∶1(即,每1摩尔式IV 化合物0.5摩尔酸)的摩尔比或以约0.65∶1至0.5∶1或约0.55∶1至 0.5∶1的摩尔过剩量使用。
如果形成的盐不能自溶液中结晶或沉淀, 则利用蒸发或冷冻干燥来分离,如果需要,再将产物进行纯化。
如果 盐结晶或者可以沉淀,则最好是选择成盐过程于其中进行的溶剂、该 溶剂的量以及温度,使得产物的结晶或沉淀是从透明的溶液出发。
如果要制备式IV化合物的半富马酸盐,即式I化合物,优选以 起始物式II式III化合物的摩尔量为基础,将约0.5摩尔富马酸加 到得到的式IV化合物的溶液中,例如若是使用二氯甲烷进行式II和 III化合物的反应和/或萃取后处理,则直接加到式IV化合物在该溶 剂中的干燥和部分蒸发过的溶液中。
在将富马酸和式IV化合物混合 后,优选先将混合物加热形成透明的溶液,例如在使用二氯甲烷的情 形约30-40℃,该溶液在冷却时开始沉淀出或者可以沉淀出式I化合 物。
为了沉淀完全,可以将悬浮液冷却到例如约-10℃至约5℃,或者 由约-5℃至约0℃,并且/或者可以加入另一种只能略溶解该盐的溶 剂。
然后利用过滤或离心分离出式I的固体半富马酸盐,洗涤,需要 时进行干燥和/或纯化。
产物是以高产率和高纯度得到。
以上反应中使用的式II和式III起始化合物可以按照下述得 到。
式III的(2S)-3-氨基-2-(萘-1-磺酰氨基)丙酸乙酯或其盐的制 备可以由式V的(S)-天冬酰胺(=(L)-天冬酰胺)出发,后者容易以光 学纯的形式得到。
在式V化合物中,氨基先在标准条件下用萘-1-磺 酸的活性衍生物,例如用式VI的萘-1-磺酰氯磺酰化,这经常在约0 ℃至约室温的温度下于碱存在下进行。
此反应可以方便地在例如有机 溶剂和水的混合物(如四氢呋喃和水或者二甲氧基乙烷和水的混合物) 中进行,使用碱金属氢氧化物(如氢氧化钠)作为碱,保持pH在碱性 范围,例如约12。
使用的各组分的摩尔比通常为约1∶1。
得到的式VII琥珀酰胺酸衍生物中的氨基甲酰基随后可以用 Hofmann降解法,即,利用氯或溴在含水碱金属氢氧化物(如氢氧化钠 或氢氧化钾)中的溶液的作用,或作为该溶液活性成分的碱金属次卤 酸盐的作用,转化成氨基,形成式VIII的3-氨基丙酸衍生物。
Hofmann 降解进行的细节优选基本上如后面实施例部分中所述,使用溴和氢氧 化钠,按照Amato等在有机化学杂志(J.Org.Chem.)63(1998)9533中 所述方法。
式VIII产物可以通过酸化至pH约6.5-7方便地从含水反 应混合物中分离,在该pH下此内盐沉淀。
由式VIII化合物形成式II化合物或其盐的酯化反应可以在标准 条件下进行,例如在酸催化剂(如气态氯化氢或硫酸)存在下与乙醇在 由约20℃至乙醇沸点的温度下反应。
优选在此酸性酯化过程中使用多 于1当量的酸,以便使形成的式VIII氨基酯以容易分离且具有较高 贮存稳定性的酸加成盐形式存在。
酯化反应的进行优选是向式VII化 合物在乙醇中的悬浮液中通入氯化氢气,并分离出盐酸盐形式的式 VIII化合物。
式II的4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰基)乙基)苯甲 酸或其衍生物或它们的盐的制备可以由市售的式IX 4-甲酰苯甲酸出 发。
在如Hu等于生物有机与医药化学(Bioorg.Med.Chem.) 5(1997)1873中所述的标准条件下,式IX的酸首先转化成合适的酯, 例如用苄基卤(如苄基溴)转化成式X的已知的苄基酯。
为了实现这一 O-烷基化,通常使酸和苄基卤在溶剂或稀释剂(例如在酰胺如N,N-二 甲基甲酰胺)中于碱(如碳酸钾)存在下在室温或高温下反应。
式X的 苄基酯可以不经进一步纯化,以粗品形式直接用于随后的步骤。
然后使式X的酯与丙二酸在Knoerenagel反应的条件下缩合,得 到式XI的肉桂酸衍生物。
当在典型的Knoerenagel缩合反应条件下, 于吡啶中在哌啶存在下加热回流进行反应时,式XI化合物的产率高 于95%(以式IX的甲酰苯甲酸为基础)。
为了顺利地与式XII的2-氨基嘧啶反应生成4-(2-(嘧啶-2-基氨 基甲酰)乙烯基)苯甲酸苄酯(式XIII),宜先将式XII化合物中的羧 酸部分活化或转化成活性更强的羧酸衍生物。
以上关于其中X是羟基 的式II羧酸的活化的说明相应地适用于式XI化合物的活化。
一种优 选的方式是,将式XI化合物用氯化剂,例如亚硫酰二氯或草酰氯, 在标准条件下转化成酰基卤,特别是酰基氯,即,转化成其中COOH被COCL代替的式XI化合物。
式XI的酸可以与例如过量的亚硫酰二 氯反应,如果需要,在一种惰性溶剂如烃或卤化烃(如甲苯)中反应, 直到不再放出二氧化硫和氯化氢为止。
在除掉溶剂和/或多余的亚硫 酰二氯之后,该酰氯粗品(或代替酰氯使用的式XI化合物的另一种活 性衍生物)随后与2-氨基嘧啶在用于形成酰胺的常规条件下反应。
以 上关于式II与式III化合物的反应的说明相应地适用于此反应。
此 反应通常在碱存在下,本情形下特别是一种叔胺,如三乙胺或者最好 是吡啶,在惰性溶剂或稀释剂中,例如在烃或卤化烃(如二氯甲烷)或 者醚或酯中进行,反应温度为约-10℃至约20℃。
随后,将得到的式XIII化合物中CH=CH-CO-N部分内的碳碳双 键还原成单键,杂芳族嘧啶-2-基部分还原成1,4,5,6-四氢嘧啶-2- 基部分,苄基酯基团裂解,以得到式XIV的4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧 啶-2-基氨基甲酰基)乙基)苯甲酸。
这三个转化可以在一个反应步骤 内同时完成,即,利用催化加氢。
因此,在本发明的合成策略中优选 经由式X、XI和XIII的苄基酯化合物进行,并利用催化加氢完成由 式XIII化合物向式XIV化合物的转化,包括酯裂解。
式XIII化合物或其盐催化加氢形成式XIV化合物优选在常用的 贵金属催化剂,例如钯、铑或铂催化剂,特别是钯/碳存在下进行。
催化剂的数量取决于反应的具体情况和所要求的反应速度,可以是例 如0.5-5mol%(以式XIII化合物为基础)。
作为溶剂或稀释剂,可 以使用一种或多种溶剂,例如乙酸、(C1-C4)醇(如甲醇、乙醇或异丙 醇,特别是异丙醇)、醚类(如四氢呋喃或二噁烷)或者水,例如乙酸 与水、异丙醇和二噁烷等溶剂中的一种的混合物,特别是乙酸和水的 混合物。
式XIII化合物的加氢优选在羧酸(如乙酸)存在下于酸性pH 下进行,乙酸也可以起溶剂作用,或者在无机酸如盐酸或硫酸存在下 进行。
优选使用弱酸,如乙酸。
氢气压力的选择取决于可利用的技术 设备,可以是约1巴,或最高达约2巴或约5巴,或者更高。
加氢反 应经常在约20-60℃的温度下进行。
在除去催化剂后,用常规方法分 离出式XIV产物(它也是其中X是羟基的式II化合物)。
如果在强酸(如 盐酸或硫酸)存在下进行加氢,则优选将产物完全转化成式XIV化合 物的各自的酸加成盐,或者将该酸中和,产物完全转化成游离的式XIV 化合物(可以是内盐)。
为了制备其中X是氯或溴的式II化合物,利用常规的氯化剂, 例如亚硫酰二氯、草酰氯或草酰溴,将式XIV化合物转化成羧酸酰卤。
优选通过与过量的亚硫酰二氯(例如每摩尔式XIV化合物1.2至2摩 尔亚硫酰二氯)反应,将式XIV化合物转化成酰基氯,即,其中X是 氯的式II化合物。
过量的亚硫酰二氯也可以作为溶剂或稀释剂使用, 或者可以加入一种惰性溶剂或稀释剂,例如烃类或氯化烃,如甲苯或 二氯甲烷,在反应完成后将其与过剩的亚硫酰二氯一起除去。
反应通 常在从约40℃至约100℃的高温下进行。
在式XIV化合物转化成酰基 卤期间形成的卤化氢被分子中的碱性胍部分结合,形成卤化氢加成 盐。
该酰基卤优选以其固态的卤化氢盐形式分离,它们可以直接用于 上面说明的与式III化合物的反应。
总之,上述的由式II和式III化合物制备式I化合物的方法, 与上述的制备式II和式III的起始化合物的方法一起,以简单的方 式和异常高的总产率由容易得到的起始物得到式I化合物。
在构筑式 I(或式IV)分子的各种有效策略之中,本发明方法中的将小的构筑单 元组装成一定的中间体而后结合得到最终目标化合物的独特方式,被 证实特别成功。
至少,本发明方法的产率比按照国际专利申请PCT/EP 99/00242的方法制备式IV中间体化合物可以得到的式I化合物的产 率要高得多,而且本发明方法比起国际专利申请PCT/EP 99/00242的 方法更简单和更易在工业规模上应用。
本发明方法的优点在很大程度 上是由于使用了关键的II和XIV中间体,即,基于使用4-(2- (1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酸及其衍生物,以及由 于它们的合适制备方法,特别是通过对其式XIII前体加氢制备式XIV 化合物的简单方法,它一步实现了去除苯甲酸苄基保护基团以及将肉 桂酸双键还原为嘧啶环。
本发明的对象还有式II和式XIV化合物,它们是有价值的中间 体,可用于制备药理活性化合物如式I的半富马酸盐,或式IV的化 合物其它盐,或含4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯 甲酰部分的其它化合物。
本发明的对象特别是式XV化合物及其盐, 其中Y是羟基、氯或溴。
式XV化合物的盐的实例是盐酸盐或溴氢酸 盐,它们特别可能在Y是氯或溴的情形存在。
其中Y是羟基而且胍基 部分不是酸加成盐的式XV化合物也被本发明转化成内盐(或甜菜 碱)。
优选的式XV化合物是其中Y为羟基或氯的那些化合物及其盐, 即,4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酸和4-(2- (1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氯及它们的盐,在其 中的Y是氯的式XV化合物的情形,特别是盐酸盐。
本发明的其它对 象是上述的通过对4-(2-(嘧啶-2-基氨基甲酰)乙烯基)苯甲酸苄酯或 其盐加氢制备4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲 酸或其盐的异常简单而高效的方法,以及作为该方法起始物的式XIII 的4-(2-(嘧啶-2-基氨基甲酰)乙烯基)苯甲酸苄酯或其盐。
式I化合物是有价值的药理活性化合物,它适合治疗和预防骨 病、肿瘤病、心血管病或炎症。
式I化合物可以作为治疗或预防药物 对动物,优选对哺乳动物,特别是对人施用。
可以施用它本身,或它 与其它药理活性化合物的混合物,或者以能够肠内或非肠内施用的药 物组合物形式给药,组合物中含有有效剂量的式I化合物作为活性成 分。
本发明因此还涉及用作药物的式I化合物,式I化合物在制备用 于治疗和预防上面或后面所述疾病(例如治疗和预防骨病)的药物中 的应用,以及式I化合物用于治疗和预防这些疾病和这类治疗及预防 的方法。
本发明还涉及药物组合物(或药物制剂),其中含有有效剂量 的式I化合物及常用的可药用载体,即,一种或多种可药用的载体物 质和/或添加物。
这些药物可以口服,例如以丸剂、片剂、涂层片剂、包衣片剂、 粒剂、硬和软明胶胶囊、溶液剂、糖浆剂、乳剂、混悬剂或气雾混合 物的形式口服。
但是也可以经直肠(例如以栓剂形式)或肠道外(例如 静脉内、肌内或皮下)以注射液或输注液、微胶囊、植入物或药棒的 形式给药,或者经皮或局部给药,例如以软膏剂、溶液、乳液或酊剂 形式给药,或者以其它方式,例如以气溶胶或鼻内喷雾剂形式给药。
本发明的药物组合物是以本身已知而且本领域技术人员熟悉的 方式制备,将式I化合物与一种或多种可药用的惰性无机和/或有机 载体物质(或赋形剂)及/或添加剂混合,需要时加上一种或多种药学 活性化合物,形成可用于人类或兽用医药的合适的给药形式和剂型。
为制备丸剂、片剂、包衣片剂和硬明胶胶囊,可以使用例如乳糖、玉 米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸及其盐。
用于软明胶胶囊和栓剂的 载体物质是例如脂肪、蜡、半固态和液态的多元醇、天然油或硬化油 等。
用于制备溶液剂(例如注射液)或乳剂或糖浆剂的合适的载体物质 是例如水、醇、甘油、多元醇、蔗糖、转化糖、葡萄糖、植物油等。
适合用于微胶囊、植入剂或药棒的载体物质是例如羟基乙酸和乳酸的 共聚物。
药物组合物通常含约0.5-90%重量的式I化合物。
药物组合 物中式I活性组分的量通常为约0.2-500mg,优选为约1-200mg, 但是取决于药物组合物的类型也可以更高。
除了式I活性组分和载体之外,药物组合物可以含有添加剂(或 辅助物质),例如,填料、崩解剂、粘合剂、润滑剂、润湿剂、稳定 剂、乳化剂、防腐剂、甜味剂、着色剂、矫味剂、芳香剂、增稠剂、 稀释剂、缓冲剂、溶剂、增溶剂、储存剂、用于改变渗透压的盐、涂 布剂或抗氧化剂。
另外,除了式I化合物,还可以含有一种或多种其 它有治疗或预防作用的成分。
式I化合物在体内是一种玻连蛋白受体的拮抗剂并抑制细胞附 着。
例如,它能够抑制破骨细胞与骨表面的结合,从而抑制破骨细胞 造成的骨吸收。
在例如下述试验中可以显示出式I化合物的作用。
因 为具有玻连蛋白受体拮抗活性,所以式I化合物一般适用于治疗和预 防以细胞-细胞相互作用过程或细胞-基质相互作用过程中玻连蛋白 受体与其配体的相互作用为基础的疾病,或是会因此类相互作用被抑 制而受影响的疾病,或者需要抑制此类相互作用实现其预防、缓解或 治愈的疾病。
正如在开始时所解释的,这种相互作用在例如骨吸收、 血管生成或血管平滑肌系统的细胞增生中起一定作用。
因此,式I化 合物适合用于防止、缓解或治疗至少部分地由不良程度的骨吸收、血 管生成或血管平滑肌系统细胞增生引起的疾病。
式I化合物可用于治疗和预防的骨病特别包括骨质疏松、血钙过 多、由于转移引起的骨质稀少、牙病、甲状旁腺机能亢进、类风湿性 关节炎和佩吉特病中的关节周围糜烂。
此外,式I化合物可用于减轻、 避免或治疗由于糖皮质激素、类固醇或皮质类固醇疗法或性激素缺乏 引起的骨骼疾病。
所有这些疾病的特征均是由于骨形成和骨破坏之间 的不平衡造成的骨损失,而且它们会因为抑制破骨细胞造成的骨吸收 而受到有利的影响。
式I化合物也适合作为骨吸收抑制剂,与常规的 骨质疏松疗法相结合,例如服用双膦酸酯、雌激素、雌激素/黄体酮(激 素替代疗法或HRT)、雌激素激动剂/拮抗剂(选择性雌激素受体调制剂 或SERM)、降钙素、维生素D类似物、甲状旁腺素、生长激素、促泌 素或氟化钠(参见Jardine等,医药化学年报(Annual Reports in Medicinal Chemistry)31(1996)211),治疗或预防骨质疏松。
服用 式I化合物和上面列出的对治疗或预防骨质疏松有效的其它活性组分 可以同时进行或以任何次序顺序进行,一起服用或分开服用。
为了用 于这种结合治疗或预防,式I化合物和例如上面列出的一种或多种其 它活性组分可以一起存在于单个的药物组合物中,例如片剂、胶囊或 粒剂中,也可以存在于两种或多种分离的药物组合物中,组合物内可 以装在单个包装中或者两个或多个分离的包装中。
式I化合物在这样 的结合治疗或预防中的应用和它们在制造用于这样一种结合治疗或 预防中的药物中的应用也是本发明的对象。
本发明还涉及药物组合 物,其中含有有效数量的式I化合物和至少另一种如上面列出的在治 疗或预防骨质疏松方面、或在抑制骨吸收方面有效的活性组分,以及 一种常见的可药用载体。
对于药物组合物的上述说明相应地适用于这 种结合的药物组合物。
除了作为由破骨细胞造成的骨吸收的抑制剂之外,式I化合物可 以用来作为肿瘤生长和肿瘤转移的抑制剂,作为消炎剂,用于治疗或 预防类风湿性关节炎,用于治疗牛皮癣,用于治疗或预防心血管病, 如动脉硬化或再狭窄,用于治疗或预防肾病或视网膜病,如糖尿病视 网膜病。
作为肿瘤生长或肿瘤转移的抑制剂,式I化合物还适合与常 规的癌症疗法结合使用。
常规的癌症疗法的实例可见Bertino(编者) 的癌症大全(Encyclopedia of Cancer),Academic Press,1997, 该书在本文引用作为参考。
以上关于式I化合物与常规的骨质疏松疗 法结合使用的所有陈述,例如可能的用药方式和结合的药物组合物, 都相应地适用于式I化合物与常规的癌症疗法的结合使用。
在使用式I化合物时,其剂量可以在很宽的范围内变化,通常要 适合于各个病例的具体情况。
例如,它取决于疾病的本质和严重程 度,及要治疗的个体的一般状况,也与要治疗的是急性或慢性病症或 是否进行预防有关。
在口服用药的情形,为了对体重约75kg的成年 人获得有效的结果,日剂量一般为约0.01-100mg/kg,优选为约 0.1-50mg/kg,特别是约0.1-5mg/kg(每种情形均为每kg体重的mg 数)。
在静脉内给药的情形,日剂量一般为约0.01-100mg/kg,优选 为约0.05-10mg/kg(每种情形均为每kg体重的mg数)。
日剂量可以 分成几份(例如2、3或4份)给药,特别是在服药量较大的情形。
通 常,根据具体情况,可能需要上调或下调所述的日剂量。
式I化合物还可用于诊断,或者在需要阻断玻连蛋白受体或者影 响细胞-细胞或细胞-基质相互作用的药理或生化研究中作为辅剂使 用。
实施例 1)4-苄氧羰基肉桂酸 a)4-甲酰苯甲酸苄酯 将304g(2mol)4-甲酰苯甲酸溶于1升二甲基甲酰胺(DMF)中, 加入304g(2.2mol)碳酸钾,然后在30分钟内在约40℃下(放热反 应)加入261ml(2.2mol)苄基溴。
将混合物在40-45℃下再搅拌4 小时,然后倒入3升冰水中,用乙酸乙酯(每次1升)萃取几次。
合并 的有机层用硫酸钠干燥,过滤,在旋转蒸发仪上减压除去乙酸乙酯。
得到503g油状物。
此粗产物直接用于下一反应步骤。
b)4-苄氧羰基肉桂酸 245g(2.4mol)丙二酸溶于360ml吡啶中(放热,温度升至约 50℃),然后加入503g粗品4-甲酰基苯甲酸苄酯(步骤a产物)和20 ml吡啶,将该混合物加热回流,直到不再产生二氧化碳(约7小时)。
将混合物冷却至室温,加入2升水,在10℃和搅拌下用约600ml浓 盐酸将混合物酸化至pH1.8使产物沉淀。
滤出沉淀的产物,用水洗, 在50℃减压干燥。
步骤a)和b)的总产率:529.1g(97%)。
MS(Cl):283.2(M+H)+1H-NMR(DMSO-D6):δ(ppm)=12.58(s,broad,1H);8.02(d,2H);7.85(d,2H);7.65 (d,1H);7.55-7.30(m,5H);6.70(d,1H);5.38(s,2H) 2)4-(2-嘧啶-2-基氨基甲酰)乙烯基)苯甲酸苄酯 将282.3g(1mol)4-苄氧羰基肉桂酸悬浮在2升甲苯中,加入 108ml(1.48mol)亚硫酰二氯。
将该混合物反应约7小时,直到不再 产生二氧化硫并得到透明的酰基氯溶液。
在旋转蒸发仪中减压蒸发溶 剂,残余物溶在1升二氯甲烷中,在一小时内逐滴加到95.2g(1 mol)2-氨基嘧啶和81ml(1mol)吡啶在2升二氯甲烷中的0-5℃溶液 中室温下搅拌反应混合物1小时,然后在旋转蒸发仪中减压蒸发。
残 余物溶在2.5升热乙醇中,然后加1.5升水,将混合物慢慢冷却至0-5 ℃,产物沉淀。
将产物滤出,用水洗,在60℃下减压干燥。
产量:317.1 g(88%)。
MS(ES):360.2(M+H)+1H-NMR(DMSO-D6):δ(ppm)=10.85(s,broad,1H);8.72(s,1H);8.68(s,1H);8.02 (d,2H);7.85(d,2H);7.65(d,1H);7.55-7.18(m,7H);5.38(s,2H) 3)4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酸 305g(0.85mol)4-(2-(嘧啶-2-基氨基甲酰)乙烯基)苯甲酸苄酯 在20升的Buchi高压釜中于8升20%乙酸水溶液中,在40℃和25g 10%钯/碳存在下,于2巴的氢气压力下加氢。
6小时后吸收了65.76 升氢,此时结束反应。
放置过夜后将混合物温热至70℃,滤出催化剂。
高压釜用3升20%乙酸水溶液在70℃洗。
催化剂用1.5升20%乙酸 水溶液在70℃洗。
在旋转蒸发仪中减压蒸发滤液,残余物借助加热溶 在1升水中。
在冷却至室温时产物沉出。
将混合物冷却到0-5℃,滤 出产物,用冷水洗,在50℃减压干燥。
产量:212g(90.6%)。
MS(ES):276.1(M+H)+1H-NMR(三氟乙酸):δ(ppm)=11.55(s);8.15(d,2H);7.40(d,2H);3.62 (dd,4H);3.18(dd,2H);2.95(dd,2H);2.15(m,2H) 4)4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氯盐酸盐 110.2g(0.4mol)4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰基) 乙基)苯甲酸悬浮在1.5升甲苯中,然后加入35ml亚硫酰二氯,将 混合物在70℃加热2小时。
接着再加入16ml亚硫酰二氯,继续加热, 直到二氧化硫不再生成。
将此几乎透明的溶液蒸发至干,得到139.5g 黄色粉末状标题化合物粗品。
此产物直接用于下一反应。
MS(FAB):294.1((M+H)+游离碱) 1H-NMR(CDCl3):δ(ppm)=13.05(s,broad,1H);9.35(s,broad,2H);8.05(d,2H); 7.40(d,2H);3.50(m,4H);3.10(dd,2H);2.95(dd,2H);2.05(m,2H) 5)(2S)-3-氨基甲酰-2-(萘-1-磺酰氨基)丙酸 132.12g(1mol)(S)-天冬酰胺溶在800ml水和500ml 2N氢 氧化钠的混合物中,加入500ml四氢呋喃,将混合物冷却至0℃,在 用2N NaOH保持pH为12.0-12.5的条件下于1小时内加入226.7g(1 mol)萘-1-磺酰氯在500ml四氢呋喃中的溶液。
将混合物在0℃搅拌 1小时,同时保持pH为12.5。
然后将混合物温热至室温,再搅拌2 小时,在室温下放置过夜。
用浓盐酸将pH调至7左右,在旋转蒸发 仪中减压除去四氢呋喃。
将剩余的水溶液冷却至0℃,在搅拌下加入 浓盐酸酸化至pH1.8。
在0℃搅拌30分钟后滤出沉淀,用水洗,在 40℃真空干燥。
产量:240g(75%)。
MS(ES):323.1(M+H)+1H-NMR(DMSO-D6):δ(ppm)=12.50(s,1H);8.65(d,1H);8.35(d,1 H);8.20(d,1H); 8.17(d,1H);8.09(d,1H);7.80-7.60(m,3H);7.28(s,1H);6.82(s,1H);4.15(m, 1H);2.45(dd,1H);2.23(dd,1H) 6)(2S)-3-氨基-2-(萘-1-磺酰氨基)丙酸 在搅拌和0℃下,于45分钟内向148g(4.1mol)氢氧化钠在940 ml水中的溶液加入26ml(0.5mol)溴。
然后分别地,将129g(0.4 mol)(2S)-3-氨基甲酰-2-(萘-1-磺酰氨基)琥珀酸溶在400ml 2N氢 氧化钠中,再加入16 g氢氧化钠。
将此溶液冷却至5℃,在激烈搅拌 下加到先前制备的次溴酸钠溶液中,同时保持反应混合物的温度低于 10℃。
将该混合物在10℃再搅拌15分,然后在30分钟内温热至45 ℃。
停止加热,该放热反应进行约1小时,峰温为约50℃。
当放热反 应停止时,在20分钟内将混合物加热至70℃,在该温度保持10分钟。
然后将反应混合物冷却至40℃,在此温度用330ml浓盐酸酸化至pH 6.8,由此使产物沉淀。
在室温下放置过夜后,将混合物冷却到10℃, 滤出产物,用水洗并真空干燥。
产量:97.7g(83%)。
MS(FAB):295.0(M+H)+1H-NMR(DMSO-D6):δ(ppm)=8.58(d,1H);8.25(d,2H);8.09(d,1H);7.90(s,Very broad,3H);7.80-7.60(m,3H);3.35(s,very broad,2H);3.18(m,1H);3.05(dd,1H); 2.82(dd,1H) 7)(2S)-3-氨基-2-(萘-1-磺酰氨基)丙酸乙酯盐酸盐 147.2g(0.5mol)(2S)-3-氨基-2-(萘-1-磺酰氨基)丙酸悬浮在 1升乙醇中,向此混合物中通入氯化氢气约2小时,因此温度升至约 35℃,得到一透明溶液。
然后在旋转蒸发仪中蒸发该混合物。
将残余 物溶于热乙醇中,加入二异丙醚,直到产物开始沉淀。
令产物在室温 下结晶过夜。
滤出标题盐酸盐,用二异丙基醚洗,真空干燥。
产量: 148g(83%)。
MS(ES):323.2((M+H)+游离碱) 1H-NMR(DMSO-D6):δ(ppm)=8.95(s,broad,1H);8.63(d,1H);8.40-8.20(m,3H); 8.13(d,1H);8.09(d,1H);7.80-7.60(m,3H);4.12(m,1H);3.50-3.36(m,2H);3.08 (dd,1H);2.92(dd,1H);0.55(t,3H) 8)(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨 基甲酰基)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯半富马酸盐 25.1g(0.07mol)(2S)-3-氨基-2-(萘-1-磺酰氨基)丙酸乙酯盐 酸盐通过加入在30ml水中的17.7g(0.21mol)碳酸氢钠溶解在100 ml二氯甲烷中。
在激烈搅拌下于30分钟内分批加入23.2g(0.07 mol)4-(2-(1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氯盐酸 盐。
将反应混合物再搅拌1小时,然后分离各层。
有机层用碳酸氢盐 溶液和水萃取,然后用硫酸钠干燥。
滤除硫酸钠,用二氯甲烷洗。
将 滤液浓缩至约100ml,向得到的(2S)-2(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2- (1,4,5,6-四氢嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯的二 氯甲烷溶液加入4.1g(0.035mol)富马酸。
将该混合物加热回流, 直到形成透明的溶液。
冷却时标题半富马酸盐开始沉淀。
加入300ml 乙酸乙酯使沉淀完全。
过滤收集产物,用乙酸乙酯洗并且干燥。
产量: 35.5g(79.5%)。
熔点201℃。
MS(FAB):580.3((M+H)+游离碱) 1H-NMR(DMSO-D6):δ(ppm)=9.73(s,broad,1H);8.8(s,very broad,1H);8.63(d, 1H);8.33(t,1H);8.16(d,1H);8.09(d,1H);8.01(d,1H);7.72-7.50(m,5H);7.24(d, 2H);6.50(s,1H);4.08(t,1H);3.68-3.45(m,4H);3.34(q,2H);3.27(t,4H);2.88 (dd,2H);2.59(dd,2H);1.79(m,2H);0.79(t,3H) 9)药理试验:在骨吸收的TPTX鼠模型中PTH诱发的血钙过多 在这一体内试验模型中,通过输注甲状旁腺素(PTH),在切除了 甲状腺甲状旁腺的(TPTX)鼠中诱发受激骨吸收。
骨吸收的变化通过测 定血清钙浓度来监视,后者与骨吸收的程度直接有关。
重150-200g的雄性Sparague Dawley鼠(OFA-IFFA CREDO, France)由供应商切除甲状腺甲状旁腺。
允许鼠自由接近含7g Ca/kg 的标准商品丸状食物(UAR)和Volvic水。
通过手术后8天测定禁食过 夜的动物的血清钙浓度试验甲状腺甲状旁腺切除术的成功。
若血清钙 含量<80mg/l,则鼠被看作是TPTX鼠。
为了用PTH处理,将鼠PTH(1-34)(Bachem)溶于含2%Cys-HCl的0.15M氯化钠溶液中,并借助微型渗透泵(ALZET 2001 D)以200 pmol/kg/h输送。
微型泵是在氯胺酮(75mg/kg)和乙酰丙嗪(2.5 mg/kg)麻醉下插入禁食过夜的TPTX鼠的腹膜内腔中。
在对照组中, TPTX鼠接受充满PTH的载液的微型泵。
为确定式I化合物的影响,PTH处理过的TPTX鼠在开始输注PTH 后的0和3小时经口服用2次10mg/kg的该化合物(化合物组)。
按 同样的方式,PTH处理的TPTX鼠施用载液(PTH组),未用PTH处理的 TPTX组施用载液(对照组)。
实验共进行6小时。
在治疗方案结束时, 断头后收集全血。
将血样在3000rpm离心15分(CR 422 Jouan)以得 到血清。
采用比色法(Ciba-Corning),用IEMS Labsystems微型板读数器 在540nm测定血清总钙浓度(=血钙浓度)。
分析各组间血钙浓度平 均值的差别以得到方差并用Dunnett试验分析。
按下式将试验化合物 的活性计算成效量%: 按10mg/kg口服两次式I化合物观察到的效果%为-45%。
这一 体内试验结果表明,式I化合物是高度有效的骨吸收抑制剂。
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