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利用分离的重组酶通过酶促拆分由其外消旋N-乙酰-D,L-衍生物制备L-氨基酸的方法

基本信息

  • 申请号 CN00810510.3 
  • 公开号 CN1175108C 
  • 申请日 2000/06/17 
  • 公开日 2004/11/10 
  • 申请人 阿温提斯作物科学有限公司  
  • 优先权日期  
  • 发明人 K·巴奇  
  • 主分类号  
  • 申请人地址 德国法兰克福 
  • 分类号  
  • 专利代理机构 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 
  • 当前专利状态 发明专利权部分无效宣告的公告 
  • 代理人 李瑛 
  • 有效性 失效 
  • 法律状态 失效
  •  

权利要求书


1.一种由其外消旋的N-乙酰-D,L-衍生物制备蛋白原的或非蛋白原 的L-氨基酸的方法,该方法包括: (a)使用浓度为50mM至1500mM的外消旋的N-乙酰-D,L衍生 物, (b)利用分离的重组马尿酸水解酶通过酶促拆分选择性地脱去相应 的L-氨基酸的N-乙酰-L衍生物的乙酰基,而相应的D-氨基酸的N-乙酰 -D衍生物的乙酰基则不被脱去,和 (c)从未脱去乙酰基的N-乙酰-D-衍生物和/或不完全脱去乙酰基的 N-乙酰-L衍生物中分离制得的脱去乙酰基的L-氨基酸。

2.如权利要求1所述的方法,其用于由外消旋的N-乙酰-D,L-膦丝 菌素制备L-膦丝菌素(L-PPT)。

3.如权利要求1所述的方法,其用于由其相应的N-乙酰-D,L衍生 物制备L-谷氨酸,L-组氨酸,L-亮氨酸,L-谷氨酰胺和/或L-苯丙氨酸。

4.如权利要求1至3中的任意一项权利要求所述的方法,其中利用 来源于寡养单胞菌属某种的deac1酶和/或来源于食酸丛毛单胞菌的 deac2酶由其相应的外消旋N-乙酰-D,L衍生物对映体选择性地制备一 种或多种L-氨基酸。

5.如权利要求1至3中的任意一项权利要求所述的方法,其中利用 来源于寡养单胞菌属某种的deac1酶和/或来源于食酸丛毛单胞菌的 deac2酶由其相应的外消旋N-乙酰-D,L衍生物对映体选择性地制备L- 膦丝菌素,L-谷氨酸,L-组氨酸,L-亮氨酸,L-谷氨酰胺和/或L-苯丙氨 酸。

6.如权利要求1至3中的任意一项权利要求所述的方法,其中制备 的重组马尿酸水解酶以固定化的形式被使用。

7.一种或多种马尿酸水解酶在由其相应的外消旋N-乙酰-D,L衍 生物对映体选择性地制备一种或多种L-氨基酸中的用途。

8.一种或多种马尿酸水解酶在由其相应的外消旋N-乙酰-D,L衍 生物对映体选择性地制备L-膦丝菌素,L-谷氨酸,L-组氨酸,L-亮氨酸, L-谷氨酰胺和/或L-苯丙氨酸中的用途。

9.来源于寡养单胞菌属某种的deac1酶和/或来源于食酸丛毛单胞菌 的deac2酶在由其相应的外消旋N-乙酰-D,L衍生物对映体选择性地制 备一种或多种L-氨基酸中的用途。

10.来源于寡养单胞菌属某种的deac1酶和/或来源于食酸丛毛单胞 菌的deac2酶在由其相应的外消旋N-乙酰-D,L衍生物对映体选择性地 制备L-膦丝菌素,L-谷氨酸,L-组氨酸,L-亮氨酸,L-谷氨酰胺和/或 L-苯丙氨酸中的用途。
展开

说明书

背景技术 以前只记载了通过用来源于大肠杆菌的青霉素G酰基转移酶裂解苯 乙酰膦丝菌素以高纯度和高产率来拆分制备非蛋白原的氨基酸L-PPT(L- 膦丝菌素)(DE-A-3048612)。
然而,苯乙酰-PPT的合成比N-Ac-PPT的 合成更复杂、成本更高。
但是,青霉素G酰基转移酶对脂族酰基不具有 特异性,因而对N-Ac-PPT也不具有特异性。
其它已知的酰基转移酶对 N-Ac-PPT同样不具有或只具有很低的底物特异性,并且以前只被用于不 需要酶纯化的微生物的生物转化中(例如,DE-A-2939269中所描述的)。
由于这个原因,只能获得很低的空间/时间产率。
专利申请EP-A-0382113 公开了利用酰基转移酶1对N-Ac-PPT羧酸酯进行的L-特异性裂解。
然 而,这种酶甚至对游离羧酸也不具有特异性因而在底物的制备过程中需 要一个作为附加合成步骤的酯化步骤。
专利申请DE-A-19652284记载了从土壤样品中特异性分离对N-乙酰 氨基酸,优选的是对N-乙酰膦丝菌素(N-Ac-PPT)具有特异性的微生物 脱乙酰酶,以及来源于寡养单胞菌属某种和食酸丛毛单胞菌的相应基因 的克隆。
基于发现的序列同源性和进行的底物特异性试验,所述脱乙酰酶可 能属于马尿酸水解酶类(EC3.5.1.32),它的天然底物是N-苯甲酰甘氨酸, 一种具有芳族N-酰基功能的氨基酸衍生物。
因此有趣的是这些酶也能接 受N-乙酰化氨基酸,特别是N-乙酰膦丝菌素作为底物,这些底物是具有 脂族N-酰基功能的氨基酸衍生物。
专利申请DE-A-2939269和 DE-A-2717440公开了外消旋膦丝菌素的除草作用只来源于它的L-对映体 (L-PPT)。
在这点上,有趣的是发现的脱乙酰酶只高特异性地裂解N-乙酰-PPT 和某些蛋白原性氨基酸的N-乙酰衍生物的L-对映体。
例如,象专利申请 EP-A-0304021,DE-A-2939269和DE-A-3048612中所记载的,这些酶因 而非常适用于根据拆分原理由其外消旋N-乙酰衍生物制备L-氨基酸,尤 其是具有除草活性的化合物L-膦丝菌素。
然而上述三个专利申请中的方 法的明显不足在于(1)只能采用低的底物浓度(在专利申请DE-A-2939269 中大约为0.5%),鉴于这一事实,所以对其工业实用性的评价将会很低, (2)采用未分离的酶进行反应,鉴于这一事实,所以不能解决或者需要 高成本才能解决副反应和后续纯化步骤的问题,和(3)产品的制备需要 高成本(如专利申请DE-A-3048612的情况)。
发明内容 本发明的目的在于以适当形式和数量表达一种或多种新型脱乙酰酶 (如在DE-A-19652284中已经得到鉴定的),和借助这些酶使通过拆分以 高产率和高对映体纯度由化学上极易得到的外消旋N-乙酰-D,L衍生物 制备L-PPT和某些蛋白原的L-氨基酸成为可能。
在已大约知道酶活性和已进行了编码该酶的核酸序列的克隆的情况 下,首先进行的操作包括将合适的核酸片段转移到合适的载体上以便在 合适的细菌菌株中进行超表达,和/或以便在超表达后分离该蛋白。
以这 种方式分离的酶可被直接用于酶促反应或通过合适的偶联基团被连接到 一种基质上。
为了大体上证实所需要的反应是否正在进行,最好首先进行一种酶 促反应试验。
所有其它步骤用来优化与反应特异性(基于起始物和产物), 反应速率,反应效率,所用酶的半衰期和可能的底物浓度有关的参数。
在个别参数不能完全符合要求的情况下,能够适当地改变编码该酶的核 酸序列,以使天然存在的酶得到进一步的优化。
专利申请DE-A-19652284已经记载了所用的各个脱乙酰酶的克隆。
按照下述实施例1中的方法将编码适当的脱乙酰酶的核酸片段再克隆到 适当的表达载体中以便由此确保确定的底物特异性达到必需的程度和不 出现副反应。
因此,尽管在专利申请DE-A-19652284中有可能表明N-乙 酰-L-PPT是脱去乙酰基的,但不可能表明N-乙酰-D-PPT是未脱去乙酰基 的。
然而,只有N-乙酰-L-氨基酸和N-乙酰-L-PPT的反应才是本申请以 工业用途为目的的基本先决条件。
本发明涉及一种由其外消旋的N-乙酰-D,L衍生物制备蛋白原的或 非蛋白原的L-氨基酸的方法,该方法包括: (a)利用分离的重组酶通过酶促拆分选择性地脱去相应的L-氨基酸 的N-乙酰-L衍生物的乙酰基,而相应的D-氨基酸的N-乙酰-D衍生物的 乙酰基则不被脱去,和 (b)从未脱去乙酰基的N-乙酰-D衍生物和/或不完全脱去乙酰基的 N-乙酰-L衍生物中分离制得的脱去乙酰基的L-氨基酸。
本发明特别涉及一种利用分离的重组酶通过酶促拆分由N-乙酰-D, L-膦丝菌素制备L-膦丝菌素(L-PPT)的方法。
本发明还涉及一种通过酶促拆分由其相应的N-乙酰-D,L衍生物制 备L-谷氨酸,L-组氨酸,L-亮氨酸,L-谷氨酰胺和/或L-苯丙氨酸的方 法。
本发明还涉及一种方法,该方法包括利用一种或多种源自于一组马 尿酸水解酶的脱乙酰酶由其相应的外消旋N-乙酰-D,L衍生物进行一种 或多种L-氨基酸的对映选择性生产,特别是利用一种或多种源自于一组 马尿酸水解酶的脱乙酰酶由其相应的外消旋N-乙酰-D,L衍生物进行L- 膦丝菌素,L-谷氨酸,L-组氨酸,L-亮氨酸,L-谷氨酰胺和/或L-苯丙氨 酸的对映选择性生产。
尤其是,本发明涉及一种方法,该方法包括利用源自于寡养单胞菌 属某种的deac1酶和/或源自于食酸丛毛单胞菌的deac2酶(两种脱乙酰 酶均被记载在DE-A-19652284中)由其相应的外消旋N-乙酰-D,L衍生 物进行一种或多种L-氨基酸的对映选择性生产,并且在本文中,尤其是 涉及利用源自于寡养单胞菌属某种的deac1酶和/或源自于食酸丛毛单胞 菌的deac2酶(两种脱乙酰酶均被记载在DE-A-19652284中)由其相应 的外消旋N-乙酰-D,L衍生物进行L-膦丝菌素,L-谷氨酸,L-组氨酸, L-亮氨酸,L-谷氨酰胺和/或L-苯丙氨酸的对映选择性生产。
两种酶具有 很高的序列同源性,因而导致在裂解N-乙酰-D,L衍生物方面的相同或 至少相似的功能。
另外,本发明涉及制备的重组脱乙酰酶作为生物催化剂的用途,该 生物催化剂能够利用高底物浓度和/或达到高空间/时间产率,尤其是利 用固定化形式的重组脱乙酰酶来进行适当的反应。
本发明还涉及上述方法在反应温度大约为25℃至65℃,优选地在反 应温度大约为30℃至45℃和特别优选地在反应温度大约为35℃至40℃ 下进行。
另外,本发明涉及上述方法在底物浓度大约为10mM至1500mM,优 选地在底物浓度为大于50mM,特别优选地在底物浓度为大于250mM和 特别优选地在底物浓度为大于500mM的条件下进行。
本发明还涉及借助上述步骤从相应的N-乙酰-D,L衍生物中分离所 制备的L-氨基酸或L-PTC,该衍生物尚未发生反应—如在N-乙酰-D衍生 物的情况下—或者未完全发生反应—如在N-乙酰-L衍生物的情况下。
在本文中,可利用的方法是采用酸性离子交换剂的离子交换色谱法 或利用有机溶剂如甲基异丁酮对N-乙酰-D,L衍生物进行萃取,其中上 述制备的L-氨基酸或L-PPT进入水相,然后通过干燥被从中浓缩。
具体实施方式 实施例 1.在大肠杆菌中以重组蛋白形式制备deac酶 来源于寡养单胞菌属某种的编码一种N-Ac-PPT-特异性脱乙酰酶的 deac1结构基因以1.4kb BamHI/SalI片段(DE-A-19652284中所述的) 的形式被克隆到来源于Quiagen的His Tag表达载体pQE30的Bam HI/SalI切割位点中[Quiaexpress试剂盒,IV型,目录号32149,St über等(1990),在Immunological Methods中,Lefkovits,I.和Pernis, B.,编辑,第IV卷,Academic Press,纽约,121-152页]。
按照标准方法进行了所有的分子-生物学研究,例如按照Ausubel等 撰写的“Current protocols in molecular biology”(1995,John Wiley 和Sons,纽约)中描述的方法进行。
将再连接构建物转化到由厂商 (Qiagen)推荐的细菌菌株E.coli M15中,并且采用100μg/ml的氨 苄青霉素和25μg/ml的卡那霉素筛选重组克隆。
通过加入1mM的IPTG 来诱导重组融合蛋白的表达。
诱导4-5小时后收集细胞并且在对蛋白质 进行加工之前一直保存在-20℃下。
通过对经诱导的克隆的细胞等分样品进行SDS/聚丙烯酰胺电泳,能 够检测到His Tag deac1融合蛋白的49kDa的附加电泳带。
脱乙酰酶融合蛋白的酶促活性通过以[14C]-N-乙酰-L-PPT作为底物 的放射性测定法来进行检测。
为此,在37℃下用0.5%的甲苯,0.5%的乙 醇对各200μl的诱导培养物进行30分钟的透化处理。
将细胞团粒分别 重新悬浮在25μl的0.1mM的[14C]-N-乙酰-L-PPT,10mM的氯化钠, 10mM的磷酸钠,pH 7.5中并在37℃下温育1小时。
为了定性测定形成 的[14C]-L-PPT,通过以正丙醇∶25%的氨=3∶2作为洗脱液在HPTLC纤维 素板(Merck)上进行薄层层析来分析各试验批料的5μl等分样品。
通 过X-射线胶片的放射自显影使放射性条带可见。
为了定量分析酶反应,通过以Spheris orbSAX作为分离柱的放 射-HPLC来测定试验批料(洗脱液:5mM的KH2PO4,10%的甲醇,pH=1.92, 流速:0.5ml/分钟)。
在这些条件下,[14C]-L-PPT在4.5分钟时被洗脱 出来,而[14C]-N-乙酰基-L-PPT在6.5分钟时被洗脱出来。
具有最高N-乙酰-L-PPT-特异性脱乙酰酶活性的表达克隆产生脱乙 酰酶蛋白,按照半定量测量方法测得该脱乙酰酶蛋白大约占总蛋白的10% 并且该脱乙酰酶蛋白被用于下述的酶纯化和生物转化。
2.通过亲和色谱法纯化脱乙酰酶: 在自然条件下,通过利用镍-次氮基三乙酸酯基质(Ni-NTA)的亲和 色谱法,按照Quiagen方法(Qiaexpress试剂盒),从根据实施例1中 描述的克隆方法而新命名的表达菌株pQEDEAC中分离脱乙酰酶蛋白。
为 此,对表达菌株pQEDEAC的800ml培养物进行发酵并按照实施例1所述 的方法进行诱导。
将收集的细胞团粒(4g)重新悬浮在20ml的裂解缓 冲液中并进行超声破碎。
离心后,采用4ml 50%强度的Ni-NTA悬浮液处 理清澈的蛋白裂解液(120mg的总蛋白)以便与His Tag融合蛋白结合, 然后将所述物质加样到一根酶柱上。
用10个体积的洗涤缓冲液洗涤亲和 基质,然后用4ml的洗脱缓冲液洗脱。
为了检测亲和纯化的纯度,通过 SDS/聚丙烯酰胺凝胶电泳分析洗涤液和洗脱液中的细胞破碎的等分样 品。
利用实施例1中所述的放射性测定法测定含有不同蛋白的分步收集 液的脱乙酰酶活性(反应批料:9μl蛋白溶液+1μl 1mM的[14C]-N-乙 酰基-L-PPT,反应条件:参见上文)。
为了定量测定酶,将蛋白分步收集 液与50mM的N-乙酰基-D,L-PPT(9μl蛋白溶液+1μl 500mM的N- 乙酰基-D,L-PPT)在37℃下温育30分钟。
然后用氨基酸分析仪 (Biotronic LC 5001)测定所产生的PPT。
细胞破碎后的粗提取物中的蛋白质具有3ncat/mg蛋白质的脱乙酰 酶比活性(1ncat=1nmol的底物/秒钟)。
通过亲和色谱法能够从800ml 的表达菌株培养物中分离到10mg的His Tag deac融合蛋白,该融合蛋 白具有20ncat/mg蛋白质的比活性和大约80%的纯度。
3.脱乙酰酶的底物特异性和立体选择性: 为了研究deac1蛋白的底物特异性和立体选择性,以20μl的批料 在10mM的NaCl,10mM的磷酸钠,pH=7.5中分别将各5μg的纯化酶 与表1中列举的各25mM的N-乙酰-L-氨基酸或相应的D-对映体一起进 行温育。
采用马尿酸(N-苯甲酰甘氨酸),脱乙酰酶的天然底物来进行比 较。
反应物在37℃下温育1小时,然后利用氨基酸分析仪(Biotronic LC5001)测定游离氨基酸的形成。
表1列出了脱乙酰酶对不同底物的L- 对映体的相对活性。
除了马尿酸和N-Ac-L-PPT外,deac1酶还另外切割 许多天然氨基酸的N-乙酰基衍生物,特别是N-Ac-L-谷氨酸,N-Ac-甘氨 酸,N-Ac-L-组氨酸,N-Ac-L-鸟氨酸,N-Ac-L-亮氨酸,N-Ac-L-谷氨酰 胺胺和N-Ac-L-苯丙氨酸。
在所有情况下,所述酶只对L-对映体有活性, 而在任何情况下所述酶都不可能使相应的D-化合物发生反应。
在所有其 它试验的情况下(参见表1),N-乙酰基-L衍生物只发生了很低程度的反 应或者根本未发生反应。
表1:deac酶的底物特异性 底物1
相对活性2[%]
马尿酸(N-苯甲酰甘氨酸)
100
N-Ac-L-膦丝菌素
43
N-Ac-L-鸟氨酸
37
N-Ac-L-蛋氨酸
0
N-Ac-L-色氨酸
0.4
N-Ac-L-苯丙氨酸
24
N-Ac-L-酪氨酸
11
N-Ac-L-谷氨酸
100
N-Ac-L-谷氨酰胺
30
N-Ac-甘氨酸
59
N-Ac-L-组氨酸
43
N-Ac-L-亮氨酸
33
N-Ac-L-缬氨酸
2
N-Ac-L-丝氨酸
4
N-Ac-L-脯氨酸
0
1:所有化合物都是L对映体 2:将利用马尿酸测定的比活性[nmol的甘氨酸/分钟/mg蛋白质]设为 100%,其它值以它为基准。
4.通过利用deac生产菌株的细胞进行生物转化来拆分N-乙酰基 -D,L-膦丝菌素 如实施例1所述对400ml表达菌株pQEDEAC的培养物进行发酵并进 行诱导。
然后用10mM的NaCl,10mM的磷酸钠,pH=7.5洗涤收集的细 胞并过夜冷冻干燥。
以这种方式处理的细胞能够在4℃下保藏数星期而仍 能保持很高的脱乙酰酶比活性并且这些细胞能被用作下列实验中的生物 催化剂。
将2mg的冻干细胞重新悬浮在1ml的下列不同浓度的底物溶液中: (1)10mM的N-乙酰-D,L-PPT,二钠盐(0.3%) (2)50mM的”                   ”(1.3%) (3)100mM的”                  ”(2.6%) (4)250mM的”                  ”(6.7%) (5)500mM的”                  ”(13.3%) 作为反应缓冲液,批料含有10mM的NaCl,10mM的磷酸钠,pH=8.0 并在100转/分钟的摇床上于37℃下温育48小时。
水解反应中形成的游 离PPT利用氨基酸分析仪(Biotronic LC5001)来进行检测。
结果列于 表2。
反应产物的对映体纯度通过采用分离柱Chirex(D)Penicillamine (Phenomenex)的手性HPLC来进行分析。
使用的洗脱液是流速为0.5ml/ 分钟的2mM的CuSO4,10%的甲醇。
采用光度计在254nm下进行检测。
在这些条件下,L-PPT的参照溶液在17分钟时洗脱出来,而D-PPT的参 照溶液在21分钟时洗脱出来。
在所有试验样品中,仅L-PPT作为反应生 成物被检测到。
达到的转化率[生成的L-PPT/底物中的N-乙酰-L-PPT ×100]为低底物浓度(10mM,50mM)时的100%至采用的最高底物浓度(500 mM)时的66%。
表2:作为底物浓度函数的N-乙酰-D,L-PPT的拆分 底物溶液
N-乙酰-L-PPT[mM]
产物溶液*
L-PPT[mM]
转化率
L-PPT/N-乙酰-D,L-PPT,以%表示
 10
 5
 100
 50
 25
 100

 100

 48

 96
 250
 108
 86
 500
 164
 66
生物催化剂的浓度:2mg/ml 在下列实验中,增加了生物催化剂的浓度并且记录了底物裂解的反 应动力学参数。
将13mg的冻干细胞重新悬浮在1ml的底物溶液中并于 37℃下在100转/分钟的摇床上进行培养,该底物溶液含有500mM的N- 乙酰-D,L-PPT,二钠盐(13.3%w/v),10mM的NaCl,10mM的磷酸 钠,pH=8.0。
为了测定所形成的L-PPT,在55小时的培养过程中,从反 应批料中分别取出50μl的各等分样品,离心并且在分析之前一直将上 清液冷冻保存在-20℃下。
反应产物L-PPT的定量分析和对映体纯度的测 定按上述方法进行。
结果列于表3中。
在选择的条件下,大约55小时后 完成L-特异性底物的裂解。
在这种情况下,获得了大约90%的转化率和 483[L-PPT的毫克数/生物催化剂的克数/小时]的空间/时间产率。
表3:N-乙酰-D,L-PPT拆分的反应动力学参数 反应时间[小时
]
L-PPT[mM]*

 0
 0
 1
 27.7
 4
 59.7
 9
 106.0
 23
 181.6
 31
 186.5
 47
 208.6
 55
 221.8
*:生物催化剂的浓度:13mg/ml 底物浓度:500mM的N-乙酰-D,L-PPT 5.纯化deac蛋白质的固定化 为了能与分离的deac蛋白进行酶反应,实施例2中纯化的酶以His Tag融合蛋白的形式被固定在聚合物载体VINA-Epoxy Biosynth(Riedel de Haen)上。
为此,通过硫酸铵沉淀将deac蛋白浓 缩到15mg/ml并用1M的磷酸钠,pH=8.0透析过夜。
在室温下缓慢振 荡10mg的所述蛋白和100mg的VINA载体2天来进行标准的偶联反应。
离心分离出固定化物并用固定化缓冲液以及50mM的磷酸钠,pH=7.0各 洗涤一次。
为了封闭游离的环氧基团,将所述载体与50mM的磷酸钠, pH=7.0,50mM的2-巯基-乙醇在室温下温育1小时。
所述生物催化剂然 后被保存在4℃下的1ml 5mM的磷酸钠,pH=7.0,0.02%的叠氮化钠中。
为了测定蛋白质的偶联,在固定化前后,并且采用洗涤溶液,借助 Bradford方法[Bradford(1976),Anal.Biochem.(生物化学分 析)72:248-254]测定溶液中的蛋白含量。
在固定化前后,利用实施例1 中描述的放射性测定法测定脱乙酰酶的比活性。
偶联后,所述酶的相对 活性为大于溶解蛋白的测定值的90%。
6.在柱反应器中利用固定化的deac酶拆分N-乙酰-D,L-膦丝菌素: 将1g的酶固定化物(湿重)加样到柱反应器中并用作拆分流速不 同的各种浓缩底物溶液的生物催化剂。
如表4中列出了在10mM NaCl, 10mM磷酸钠,pH=8.0中含有不同浓度的N-乙酰-D,L-PPT,二铵盐的 底物溶液。
反应在37℃下总共进行10天。
通过利用氨基酸分析和手性 HPLC(参见实施例4)测定流经柱的物质中存在的L-PPT来定量分析该反 应。
结果见表4。
采用最高底物浓度(500mM)和最低底物流速(0.03ml/ 分钟)获得了83%的最高转化率。
空间/时间产率随着流速和底物浓度而 增加并且在500mM的底物浓度和0.3ml/分钟的流速的条件下,达到了 181[L-PPT的毫克数/生物催化剂的克数/小时]的最高值。
在整个实验过 程中,固定化的脱乙酰酶显示出良好的稳定性并且在37℃下10天以后仍 具有大约80%的起始活性。
表4:在柱反应器中利用固定化的deac酶拆分N-乙酰-D,L-PPT
底物溶液
N-乙酰-D,L-PPT
[mM]

流速
[ml/分钟]


产物溶液
L-PPT[mM]


转化率
[%]


空间/时间产率[L-PPT的
毫克数/生物催化剂的克
数/小时]*
100
 0.1
 29.7
 59
 39
 0.3
 22.0
 44
 87
 0.5
 13.8
 28
 91
250
 0.1
 38.4
 31
 50
 0.3
 25.0
 20
 99
 0.5
 18.1
 14
 119
500
 0.1
 71.1
 28
 93
 0.3
 46.0
 18
 181
 0.5
 26.3
 11
 173
500
 0.03
 208.2
 83
 82
在37℃下反应 展开

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